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小麦品种陕253γ-醇溶蛋白基因的克隆、原核表达与功能鉴定
  • ISSN号:0496-3490
  • 期刊名称:作物学报
  • 时间:2011
  • 页码:79-86
  • 分类:S511.035.3[农业科学—作物学]
  • 作者机构:[1]西北农林科技大学农学院,陕西杨凌712100, [2]陕西省小麦工程技术研究中心/陕西省小麦新品种培育工程研究中心,陕西杨凌712100
  • 相关基金:国家自然科学基金青年科学基金项目(30900896); 陕西省“13115”科技创新工程重大项目(2007ZDKG-01); 现代农业产业技术体系建设专项(NYCYTX-001); 西北农林科技大学基本科研业务费青年项目(QN2009007)资助
  • 相关项目:中国春-簇毛麦易位系的加工品质效应及相关外源基因的挖掘与利用
中文摘要:

利用设计合成的特异γ-醇溶蛋白基因引物,采用PCR方法从小麦品种陕253克隆获得一个γ-醇溶蛋白基因(GenBank登录号为GQ857626)。序列分析表明,该基因编码产物的II区由于碱基转换产生一个额外的半胱氨酸残基。构建了GQ857626的原核表达载体并转入表达菌株E.coli Rosetta gami B(DE3),IPTG诱导其成功表达。使用HisTrap HP组氨酸标记亲和层析柱纯化该基因的表达产物,并使用4 g粉质仪分析其功能。结果显示,将此纯化蛋白通过氧化还原反应整合到基础面粉后,面团的形成时间缩短,稳定时间减少,弱化度增加,导致主要的粉质指数明显下降,说明该亚基对面团流变学性质整体表现不利。

英文摘要:

The γ-gliadin gene(GenBank accession No.GQ857626) was isolated from a wheat(Triticum aestivum) cultivar with a hight quality Shaan 253,using inductuion a set of genome specific primers.The deduced amino acid sequence of GQ857626 ex-hibited an additional cysteine residue in the region II of mature γ-gliadin subunits compared to the previous report.A prokaryotic expression vector was constructed to express GQ857626 in the host bacterium Escherichia coli Rosetta-gami B(DE3).The SDS-PAGE and Western blot analysis confirmed that the fusion protein was expressed by induction of 0.1 mmol L-1 isopro-pyl-β-D-thiogalactoside(IPTG),and its actual molecular weight was about 50 kD nearly equal to the predicted.After separation and purification using HisTrap HP affinity chromatography,the function of fusion protein was tested by means of micro 4 g farinograph.When the subunit of GQ857626 was integrated into the control flour through oxidation-reduction reaction,many important farinograph parameters changed drastically,such as development time,dough stabilizing time,degree of softening.Al-though the gluten strength of the control flour could be improved in some degree,the subunit of GQ857626 showed a negative effect on the rheological properties of wheat flour.

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期刊信息
  • 《作物学报》
  • 北大核心期刊(2011版)
  • 主管单位:中国科学技术协会
  • 主办单位:中国作物学会 中国农业科学院作物科学研究所
  • 主编:万建民
  • 地址:北京海淀区中关村南大街12号中国农业科学院
  • 邮编:100081
  • 邮箱:zwxb301@caas.cn
  • 电话:010-82108548
  • 国际标准刊号:ISSN:0496-3490
  • 国内统一刊号:ISSN:11-1809/S
  • 邮发代号:82-336
  • 获奖情况:
  • 2002年-第三届中国科协优秀科技期刊二等奖,2002-2009年-百种中国杰出学术期刊,2004年获“全国优秀期刊一等奖”,2005年获第三届国家期刊奖提名奖,2009年评为“2008年度中国精品科技期刊”,2009年被评为“新中国60年有影响力的期刊”,2011年获"第二届中国出版政府奖期刊奖提名奖"
  • 国内外数据库收录:
  • 俄罗斯文摘杂志,美国化学文摘(网络版),英国农业与生物科学研究中心文摘,波兰哥白尼索引,美国剑桥科学文摘,日本日本科学技术振兴机构数据库,中国中国科技核心期刊,中国北大核心期刊(2004版),中国北大核心期刊(2008版),中国北大核心期刊(2011版),中国北大核心期刊(2014版),英国食品科技文摘,中国北大核心期刊(2000版)
  • 被引量:49369