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集在线荧光分析的连续流动反转录-聚合酶链式反应快速扩增检测食源致病性轮状病毒
  • ISSN号:0253-3820
  • 期刊名称:《分析化学》
  • 时间:0
  • 分类:Q785[生物学—分子生物学]
  • 作者机构:[1]华南师范大学激光生命科学教育部重点实验室暨激光生命科学研究所,广州510631
  • 相关基金:国家自然科学基金项目(Nos.61072030 30700155); 国家自然科学基金-广东联合基金重点项目(No.U0931005); 科技部国家重点基础研究973计划项目(Nos.2010CB732602:2011CB910402); 教育部“长江学者与创新团队计划”创新团队项目(No.IRT0829)资助项目
中文摘要:

采用含RNA反转录(Reverse transcription,RT)和在线荧光分析的连续流动聚合酶链式反应(Poly-merase chain reaction,PCR)微流控技术检测食源致病性轮状病毒。此RT-PCR微流控装置以加热铜块组成恒温带,以聚四氟乙烯毛细管微通道为反应体系构建而成。采用循环水冷却退火区,此装置能获得低至31℃的退火温度,而且温度控制及其稳定性良好,因而能满足不同PCR的要求。为了充分体现PCR微流控技术的优越性,在线荧光分析被用于检测PCR产物。当流速为7.5 mm/s时,轮状病毒RNA的cDNA扩增和在线荧光分析能在约12 min完成(扩增约10 min,在线分析约2 min)。在此集成化的RT-PCR微流控装置上,1 h可完成轮状病毒RNA的RT-PCR以及其扩增产物的在线荧光分析,样品检出限达到6.4×104 copies/μL。

英文摘要:

A continuous-flow polymerase chain reaction(PCR) microfluidics integrated with reverse transcription(RT) of RNA and online fluorescence analysis has been introduced,which has been successfully applied for fast amplification and identification of foodborne pathogenic Rotavirus.On this continuous-flow RT-PCR device,the isothermal heating copper blocks provides the temperatures for RT-PCR,and the polytetrafluoroethylene(PTFE) capillary was used as the RT-PCR reaction channel.By using the cycling water to cool the annealing zone,the annealing temperature as low as 31 ℃ could be obtained for the presented device,where good temperature control and stability was also achieved.Therefore,this device can meet different PCR requirements.To make the best of the advantages of microfluidic PCR,the online fluorescence analysis of amplification products has been performed.When the flow rate of 7.5 mm/s was used,the amplification of cDNA synthesized from Rotavirus RNA and then the online fluorescence analysis of amplification products could be completed in about 12 min(about 10 min for amplification and 2 min for analysis).By using this microfluidic device,the RT-PCR of Rotavirus RNA and the online fluorescence analysis of its products can be accomplished within 1 h or so,and as well the detection limit of the RNA concentration is 6.4×104 copies/μL.

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期刊信息
  • 《分析化学》
  • 北大核心期刊(2011版)
  • 主管单位:中国科学院
  • 主办单位:中国化学会 中国科学院长春应用化学研究所
  • 主编:杨秀荣
  • 地址:长春市人民大街5625号
  • 邮编:130022
  • 邮箱:fxhx@ciac.ac.cn
  • 电话:0431-85262017
  • 国际标准刊号:ISSN:0253-3820
  • 国内统一刊号:ISSN:22-1125/O6
  • 邮发代号:12-6
  • 获奖情况:
  • 1999获首届国家期刊奖,2000年获中国科学院优秀期刊特别奖,2001年入选中国期刊方阵“双高”期刊
  • 国内外数据库收录:
  • 俄罗斯文摘杂志,美国化学文摘(网络版),荷兰文摘与引文数据库,美国工程索引,美国乌利希期刊指南,美国剑桥科学文摘,美国科学引文索引(扩展库),日本日本科学技术振兴机构数据库,中国中国科技核心期刊,中国北大核心期刊(2004版),中国北大核心期刊(2008版),中国北大核心期刊(2011版),中国北大核心期刊(2014版),英国英国皇家化学学会文摘,中国北大核心期刊(2000版)
  • 被引量:52455