位置:成果数据库 > 期刊 > 期刊详情页
荧光光谱法定量测定纤维素酶活性架构中单个氨基酸突变对底物结合力的影响
  • ISSN号:1000-3282
  • 期刊名称:《生物化学与生物物理进展》
  • 时间:0
  • 分类:Q81[生物学—生物工程] Q93[生物学—微生物学]
  • 作者机构:山东大学微生物技术国家重点实验室,济南250100
  • 相关基金:国家自然科学基金(31570051,31370111)和山东省重点研发计划(2015GSR121019)资助项目.
中文摘要:

纤维素酶活性架构是酶分子中多个氨基酸残基构成的可结合并催化底物的功能区,其中色氨酸等芳香族残基在该区域中起着重要作用.本研究利用荧光光谱法,定量分析了纤维素酶Ch Cel5A活性架构中色氨酸与底物的结合动力学过程,通过色氨酸荧光猝灭的定量分析,确定了色氨酸特异性结合时的底物浓度范围,并且测定了Ch Cel5A活性架构中单个氨基酸突变导致的底物结合常数的变化,与催化动力学参数比较发现,荧光光谱法可准确表征纤维素酶与底物的结合力及其单个残基突变引起动力学参数的变化.此外,由于p NP中含有强的吸电子基团,因而以p NPC等为配体时会高估与色氨酸的结合常数约20-100倍.荧光光谱法可以测定纤维素酶结合糖分子底物的动力学参数,该方法具有灵敏和快速的特点,这为蛋白质与底物之间相互作用的定量分析提供了新的视角.

英文摘要:

The active-site architecture of cellulase is a functional area composed of multiple amino acid residues which can bind and catalyze substrates. Aromatic residues, such as tryptophan, play important roles in the function of this region. In this study, the dynamic of binding process between tryptophan in active-site architecture of cellulase Ch Cel5 A and substrate was quantitatively analyzed using fluorescence spectrum. The substrate concentration range when tryptophan can specifically bind the substrate was determined and the change of binding constant caused by a single amino acid mutation in active-site architecture of Ch Cel5 A was measured through quantitative analysis of tryptophan fluorescence quenching. Compared with the measurement of kinetic parameters,fluorescence spectroscopy could accurately characterize the binding affinity between cellulase and substrate, as well as the change of kinetic parameter caused by a single residue mutation. Besides, when using p NPC as the ligand, the binding constant could be overestimated for 20-100 times due to the increase of strong electrophilic groups. Fluorescent spectrometry can measure the kinetic parameter of cellulase-substrate binding process in a sensitive and rapid way, providing a new perspective for the quantitatively analyzing the interaction between proteins and substrates.

同期刊论文项目
同项目期刊论文
期刊信息
  • 《生物化学与生物物理进展》
  • 中国科技核心期刊
  • 主管单位:中国科学院
  • 主办单位:中国科学院生物物理研究所 中国生物物理学会
  • 主编:王大成
  • 地址:北京市朝阳区大屯路15号
  • 邮编:100101
  • 邮箱:prog@sun5.ibp.ac.cn
  • 电话:010-64888459
  • 国际标准刊号:ISSN:1000-3282
  • 国内统一刊号:ISSN:11-2161/Q
  • 邮发代号:2-816
  • 获奖情况:
  • 1999年中国期刊奖提名奖,2000年中国科学院优秀期刊特别奖
  • 国内外数据库收录:
  • 美国化学文摘(网络版),荷兰文摘与引文数据库,美国剑桥科学文摘,美国科学引文索引(扩展库),美国生物科学数据库,日本日本科学技术振兴机构数据库,中国中国科技核心期刊,中国北大核心期刊(2004版),中国北大核心期刊(2008版),中国北大核心期刊(2011版),中国北大核心期刊(2014版),中国北大核心期刊(2000版)
  • 被引量:18821