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茶树丝氨酸羧肽酶基因的克隆及表达分析
  • ISSN号:1000-369X
  • 期刊名称:茶叶科学
  • 时间:2013.6.15
  • 页码:202-211
  • 分类:S571.1[农业科学—茶叶生产加工;农业科学—作物学] Q946.5[生物学—植物学]
  • 作者机构:[1]安徽农业大学教育部茶叶生物化学与生物技术重点实验室,安徽合肥230036, [2]安徽农业大学生命科学学院,安徽合肥230036
  • 相关基金:国家自然科学基金(30972401、31170647和31170282); 安徽省自然科学基金(11040606M73); 安徽省高校自然科学基金(KJ2012A110)
  • 相关项目:茶树酚类物质合成相关多基因家族表达模式及功能分析
中文摘要:

近年来,人们发现丝氨酸羧肽酶类蛋白(SCPL)参与植物次生代谢产物的酰基转移过程,即具有转酰基功能。本研究采用RT-PCR技术,获得了3个茶树丝氨酸羧肽酶基因的全长序列;生物信息学分析表明,3个CsSCPL蛋白均包含了1个底物结合位点、3个催化作用保守区和多个N-糖基化位点,及其Ser-Asp-His三联体催化中心等SCPL家族的典型特征;进化树分析表明,3个CsSCPL可能具有酰基转移酶的功能。实时荧光定量PCR结果表明3个基因在芽叶茎根中都有表达,其中,CsSCPL1和CsSCPL3在叶中的相对表达量明显高于茎和根,而CsSCPL2则在根中高表达。本研究成功地将CsSCPL重组到表达载体pET32a(+)上进行原核表达,并对诱导时间及诱导温度进行了优化;经IPTG诱导、SDS-PAGE检测,目标蛋白条带分子量为70 kD,与预测大小相符。

英文摘要:

In recent years, serine carboxypeptidase-like proteins (SCPL) have been found that they are involved in plant secondary metabolites with the function of transferring acyl. The full-length cDNA of three CsSCPL were cloned from Camellia sinensis by RT-PCR technology. Bioinformatics analysis showed that the three CsSCPL proteins contained SCPL family's characteristic structures, such as one substrate binding and three catalysis conserved regions, a number of N-glycosylation sites and a conserved catalytic triad Ser-Asp-His amino acid active catalytic site and so on. The phylogeny analysis showed that CsSCPL probably possessed acyltransferase function. Quantitative RT-PCR analysis showed that the CsSCPL genes expressed in bud, leaf, stem and root. The relative expression of CsSCPL1 and CsSCPL3 in the leaves was significantly higher than that in stems and roots, while CsSCPL2 was highly expressed in the root. The CsSCPL genes were constructed into expression vector pET-32a(+) for over expression in prokaryotic cells and optimal inducing conditions including time, temperature were studied. The SDS-PAGE showed that recombinant proteins with formula weight 70 kD were induced successfully by IPTG, which coincided with the prediction.

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期刊信息
  • 《茶叶科学》
  • 中国科技核心期刊
  • 主管单位:中国科协
  • 主办单位:中国茶叶学会
  • 主编:朱永兴
  • 地址:浙江省杭州市梅灵南路9号
  • 邮编:310008
  • 邮箱:cykx@vip.163.com
  • 电话:0571-86651902
  • 国际标准刊号:ISSN:1000-369X
  • 国内统一刊号:ISSN:33-1115/S
  • 邮发代号:
  • 获奖情况:
  • 第五届全国农业期刊金犁奖,第五届全国农业期刊主编金犁奖,浙江省2005~2006年度优秀科技期刊1等奖
  • 国内外数据库收录:
  • 美国化学文摘(网络版),英国农业与生物科学研究中心文摘,日本日本科学技术振兴机构数据库,中国中国科技核心期刊,中国北大核心期刊(2004版),中国北大核心期刊(2008版),中国北大核心期刊(2011版),中国北大核心期刊(2014版),英国英国皇家化学学会文摘,英国食品科技文摘,中国北大核心期刊(2000版)
  • 被引量:9506