中文摘要：

乙醇是产酸克雷伯氏菌（Klebsiella oxytoca）HP1厌氧发酵产H2的主要副产物，每生成1．0mol的乙醇需要消耗2．0mol NAD（P）H，从而降低了H2的产量．本研究以编码乙醇脱氢酶系（含乙醛脱氢酶和乙醇脱氢酶活性）的adhE基因为改造目标，利用同源重组技术获得了以提高产氢为目标的K.oxytoca重组菌．构建工作包括：根据adhE基因保守序列框克隆K.oxytoca HP1 adhE基因片段，以质粒pMHE6为模板进行链霉素抗性基因表达盒的扩增，表达链霉素抗性的aadA基因片段和adhE基因片段分别与载体pMD18-T相连构建重组质粒，同源整合质粒pTA-Str的构建，以链霉素作为筛选标记筛选重组菌．菌落PCR鉴定结果表明，aadA基因表达盒通过质粒pTA-Str的介导已定点插入Koxytoca HP1基因组中，成功地构建了adhE基因部分片段缺失的重组菌．葡萄糖发酵实验结果表明，相同发酵条件下，重组菌比野生菌的产氢量提高了16．07％，乙醇产量下降了70．47％．利用基因工程技术提高产氢初步获得成功．