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根癌农杆菌介导的异角状拟盘多毛孢菌转化系统研究
  • ISSN号:1000-2006
  • 期刊名称:南京林业大学学报(自然科学版)
  • 时间:2012
  • 页码:28-32
  • 分类:S764[农业科学—森林保护学;农业科学—林学]
  • 作者机构:[1]南京林业大学,江苏省有害生物入侵预防与控制重点实验室,江苏南京210037, [2]江西农业大学园林与艺术学院,江西南昌330045
  • 相关基金:国家重点基础研究发展计划(2009CB119205);国家自然科学基金项目(31000303);江苏省自然科学基金项目(BK2010566);国家林业局林业公益性行业科研专项项目(200704026);江苏省高校优势学科建设工程资助项目
  • 相关项目:松材线虫致病相关基因的克隆与RNA干扰研究
中文摘要:

以携带潮霉素B磷酸转移酶抗性基因(hph)的pBHt1作为转化载体,根癌农杆菌AGL-1作为转化介体,实施转化异角状拟盘多毛孢菌。研究发现,异角状拟盘多毛孢菌的最优转化体系为:异角状拟盘多毛孢菌分生孢子悬浮液浓度为1×10^6个/mL,根癌农杆菌OD600为0.3,共培养时间48h,共培养温度为25℃,诱导培养基中乙酰丁香酮(AS)浓度为200μmoL/L,选择培养基添加250μg/mL潮霉素B、250μg/mL头孢噻肟钠。1×10^6个异角状拟盘多毛孢菌分生孢子可以产生200~300个转化子,随机挑选10个转化子进行PCR检测,均能扩增出预期条带,且在不含潮霉素B的PDA培养基平板上转化子连续培养5代后,hph基因仍能稳定遗传,这表明T—DNA已经插入到异角状拟盘多毛孢菌的基因组中。此次建立的异角状拟盘多毛孢菌的转化体系可为该病菌的功能基因研究和寄主与病原菌的互作研究提供有效的工具。

英文摘要:

In this study, we developed an Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation system for Pestalotiopsis heterocornis by using A. tumefaciens strain AGL-1 which carried plasmid pBHtl harboring the hygromycin B phosphotransferase gene(hph). The results showed a total of 200 -300 transformants were obtained per 1 ×10^6 spores when the spore suspension were co-cultivated with A. tumefaciens cells, the optimal conditions were OD600 = 0.3, 25 ℃, and 48 h cultivation in the presence of induction medium containing acetosyringone at 200 μg/mL. Selection medium performed best with concentrations of 250 μg/mL of hygromycin B and 250μg/mL of cefotaxime sodium in PDA. To detect the heredity stability, ten random transformants were cultivated on the PDA medium for five generations, colony PCR of each generation obtained expected amplification bands, which showed that the transformants exhibit high heredity stability. The transformation system will be useful for further studies of functional genes and host-pathogen interaction in P. heterocornis.

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期刊信息
  • 《南京林业大学学报:自然科学版》
  • 中国科技核心期刊
  • 主管单位:江苏省教育厅
  • 主办单位:南京林业大学
  • 主编:曹福亮
  • 地址:南京市龙蟠路159号南京林业大学学报编辑部
  • 邮编:210037
  • 邮箱:xuebao@njfu.edu.cn
  • 电话:025-85428247 85427076
  • 国际标准刊号:ISSN:1000-2006
  • 国内统一刊号:ISSN:32-1161/S
  • 邮发代号:28-16
  • 获奖情况:
  • 全国高校优秀学术期刊一等奖、江苏省自然科学学报...
  • 国内外数据库收录:
  • 美国化学文摘(网络版),英国农业与生物科学研究中心文摘,波兰哥白尼索引,英国科学文摘数据库,英国动物学记录,日本日本科学技术振兴机构数据库,中国中国科技核心期刊,中国北大核心期刊(2004版),中国北大核心期刊(2008版),中国北大核心期刊(2011版),中国北大核心期刊(2014版),中国北大核心期刊(2000版)
  • 被引量:21690