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新城疫病毒LaSotaC5株感染性克隆的构建及病毒拯救
  • ISSN号:1674-6422
  • 期刊名称:中国动物传染病学报
  • 时间:2013.12.15
  • 页码:1-7
  • 分类:S852.659.5[农业科学—基础兽医学;农业科学—兽医学;农业科学—畜牧兽医]
  • 作者机构:[1]中国农业科学院上海兽医研究所,上海200241
  • 相关基金:基金项目:863项目(2011AA10A209);国家自然科学基金项目(31101822)
  • 相关项目:病毒P蛋白磷酸化水平对新城疫基因组转录和复制的调控机制研究
中文摘要:

将本实验室保存的一株LaSota病毒用有限稀释法接种鸡胚进行纯化,连续传代5次后筛选到1株高血凝效价的纯培养克隆株,命名为LaSotaC5,并对其进行全基因组测序,克隆株与亲本株在生物学特性与基因序列上都存在一定的差异。参照LaSotaC5株全基因序列单酶切位点,用RT-PCR的方法将基因组分8段扩增,按照病毒基因组的结构顺序,将克隆片段定向插入到TVT转录载体中,成功构建含有病毒全长eDNA的转录载体TVT.LaSotaC5。将TVT-LaSotaC5与辅助质粒pCI-NP、pCI-P和pCI—L共转染BSR—T7/5细胞,成功拯救出了具有感染性的LaSota株新城疫病毒。病毒的成功拯救为后续基因功能和疫苗载体开发等方面的研究提供了平台。

英文摘要:

Newcastle virus (NDV) La Sota strain kept in our laboratory was purified by limiting dilution via chicken embryo inoculation. After 5 passages, a high hemagglutinating clone was identified and designated as La Sota C5. The whole genome of La Sota C5 was sequenced. Some differences in biological characteristics and gene sequences were found between La Sota C5 and its parental strain. The La Sota C5 genome was divided into 8 fragments according to its suitable restriction digestion sites. These 8 fragments were then amplified in RT-PCR and cloned into the transcription vector TVT in accordance with the structure of the viral genome sequence. The resulting transcription vector TVT-La Sota C5 contained complete cDNA of La Sota C5. The vector TVT-La Sota C5 together with 3 helper plasmids pCI-NP, pCI-P and pCI-L were transfected into BSR-T7/5 cells. The infectious La Sota strain viruses were successfully rescued. The availability of infectious clone ofNDV La Sota strain would provide a platform for further study on virus gene functions and development of vaccines.

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期刊信息
  • 《中国动物传染病学报》
  • 中国科技核心期刊
  • 主管单位:中国农业部
  • 主办单位:中国农业科学院上海兽医研究所
  • 主编:童光志
  • 地址:上海市闵行区紫月路518号
  • 邮编:200241
  • 邮箱:bianjibu@shrri.ac.cn
  • 电话:021-34293142
  • 国际标准刊号:ISSN:1674-6422
  • 国内统一刊号:ISSN:31-2031/S
  • 邮发代号:4-748
  • 获奖情况:
  • 第二届全国畜牧兽医优秀期刊二等奖,首届《CAJ-CD规范》执行优秀奖
  • 国内外数据库收录:
  • 美国化学文摘(网络版),中国中国科技核心期刊,中国北大核心期刊(2014版)
  • 被引量:1517