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时间分辨荧光检测组合式DNA芯片
  • 期刊名称:湖南工业大学学报,2007.1:21(1):56-61
  • 时间:0
  • 分类:O656.31[理学—分析化学;理学—化学]
  • 作者机构:[1]湖南工业大学绿色包装与生物纳米技术应用重点实验室,湖南株洲412008, [2]东南大学生物电子学国家重点实验室,江苏南京210096
  • 相关基金:国家自然科学青年基金资助项目(20505020),湖南省教育厅基金资助项目(05C508),湖南省普通高校青年骨干教师培养计划资助项目(2005-2008),湖南省自然科学基金资助项目(04jj40023,05jj40053),广东省自然科学基金资助项目(04008782)
  • 相关项目:基于磁性纳米粒子分离与SQUID检测的超灵敏病菌与病毒的定量分析与应用研究
中文摘要:

研究了时间分辨荧光标记与检测组合式DNA芯片的方法。首先在薄玻璃片上原位合成寡核苷酸的序列片段,然后将之裁成小片,随后将带有不同DNA片段序列的小片拼接组合成组合式DNA芯片。利用4,7-二氯磺酰苯基.1,10-菲罗啉-2,9-二羧酸(BCPDA)多重标记的亲和素-生物素放大效应,建立了时间分辨荧光检测组合式DNA芯片的方法:芯片上的DNA序列经过杂交后,其互补序列末端的生物素可将多重BCPDA标记的亲和素联接,然后由BCPDA对铕离子(Eu^3+)捕获与解离来实现杂交信号差别,并可实现对正配、单碱基错配、二及三碱基错配的时间分辨荧光信号差别的检测。对BCPDA标记的系列化合物进行了荧光性能表征,并对时间分辨荧光检测与传统荧光检测模式作了比较。

英文摘要:

Utilizing 4, 7-bis (chlorosulfophenyl)-1, 10-phenanthroline-2, 9-dicarboxylic acid (BCPDA, abbreviated as BCPDA) labeling method based on avidin-biotin amplification, we established a TRF detection format on the mosaic DNA chip: the detection method allows discriminatory signals for perfect match, one-base mismatch, two-base mismatch and three-base mismatch by TRF labeled DNA hybridization, whereby Europium (Ⅲ, Eu^3+) was captured and released on the principle of complexation and dissociation interaction between BCPDA and Eu^3+ solution when the BCPDA-tagged avidin and biotin-capped oligonucleotide sequence linked. The fluorescence spectra and related lifetimes were determined. We also compared the TRF detection mode with the conventional fluorescence one.

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