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脑提取物中Calcineurin活性测定方法的优化
  • ISSN号:0476-0301
  • 期刊名称:《北京师范大学学报:自然科学版》
  • 时间:0
  • 分类:Q55[生物学—生物化学]
  • 作者机构:[1]北京师范大学生命科学学院生物化学与分子生物学系,北京100875
  • 相关基金:国家自然科学基金资助项目(30400554,30470393,30228006)
中文摘要:

以^32 P标记的RII多肤为底物,研究了在脑提取物中钙调神经磷酸酶(CN)活性的测定过程中,CN活性依赖的一些离子或蛋白及测活条件对CN活性的影响,对脑提取物中CN活性的测定方法进行了优化.实验表明,脑提取物中的Ca^2+足以激活CN活性,在测活反应体系中不需再补加Ca^2+,但补加钙调素(CAM)是必须的,其在反应体系中的最适浓度是0.13μmol·L^-1;抑制反应体系中的CN活性的最适EGTA浓度为0.16mmol·L^-1;对于脑提取物中的CN活性,Mn^2+是比Mg^2+更有效的激活剂,其最适终浓度为0.5mmol·L^-1;脑匀浆过程中蛋白酶抑制剂的加入有助于在90min内保持CN的活性.

英文摘要:

In the course of measurement of Calcineurin (CN) activity in brain extracts, the effects on CN activity of some important ion metals and proteins, as well as some conditions of measurement of activity are investigated with RII phosphopeptide substrate. The method of measurement of CN activity in brain extracts is optimized. The results show that Ca^2+ is sufficient to activate CN in brain extracts and it is unnecessary to add Ca^2+ to assay buffer. However, it is necessary to add CaM to assay buffer to activate CN in brain extracts and the optimal concentration is 0. 13 μmol·L^-1. The optimal concentration of added EGTA is 0. 16 mmol·L^-1 to inhibit CN activity in brain extracts effectively. Mn^2+ is a more effective activator than Mg^2+ on CN activity in brain extracts, and the optimal final concentration of Mn^2+ is 0.5 mmol·L^-1 in assay buffer. In addition, the protease inhibitors added in the course of preparation of brain extracts are helpful for keeping CN activity.

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期刊信息
  • 《北京师范大学学报:自然科学版》
  • 中国科技核心期刊
  • 主管单位:中华人民共和国教育部
  • 主办单位:北京师范大学
  • 主编:刘文彪
  • 地址:北京新外大街19号
  • 邮编:100875
  • 邮箱:JBNUNS@bnu.EDU.CN
  • 电话:
  • 国际标准刊号:ISSN:0476-0301
  • 国内统一刊号:ISSN:11-1991/N
  • 邮发代号:82-406
  • 获奖情况:
  • 1997年全国第二届科技期刊评比一等奖,1999年教育部优秀科技期刊二等奖,1999年首届国家期刊奖,中国期刊方阵“双高”期刊
  • 国内外数据库收录:
  • 俄罗斯文摘杂志,美国化学文摘(网络版),美国数学评论(网络版),德国数学文摘,英国科学文摘数据库,英国动物学记录,日本日本科学技术振兴机构数据库,中国中国科技核心期刊,中国北大核心期刊(2004版),中国北大核心期刊(2008版),中国北大核心期刊(2011版),中国北大核心期刊(2014版),中国北大核心期刊(2000版)
  • 被引量:10672