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重组毕赤酵母细胞壁蛋白的抽提和分析
  • ISSN号:1000-565X
  • 期刊名称:华南理工大学学报(自然科学版)
  • 时间:0
  • 页码:101-106+120
  • 分类:Q753[生物学—分子生物学]
  • 作者机构:[1]华南理工大学生物科学与工程学院,广东广州510006
  • 相关基金:国家自然科学基金资助项目(20976062);国家自然科学基金青年基金资助项目(30900017)
  • 相关项目:南极假丝酵母脂肪酶B展示过程中“锚定”与“分泌”两种类型共存的机制及调控
中文摘要:

建立稳定有效的细胞壁蛋白(CWPs)抽提方法,是开展毕赤酵母细胞壁蛋白质组学及甲醇代谢调控相关性研究的基础.为此,以具重组非共价结合壁蛋白Flo1p絮凝素的酵母GS115/KFS-CALB、具共价结合壁蛋白α凝集素的酵母GS115/KNS-CALB和具重组共价结合壁蛋白Pir1的酵母GS115/Pir1-CALB为对象,用热十二烷基磺酸钠(SDS)、昆布多糖酶、氢氟酸吡啶和温和碱水解对上述壁蛋白进行抽提,结果表明:3种壁蛋白已成功地展示于毕赤酵母细胞壁的表面;用这3种毕赤酵母锚定蛋白展示脂肪酶,对细胞的生长状况影响不大,而对展示酶的表达量影响较大,GS115/KFS-CALB、GS115/KNS-CALB和GS115/Pir1-CALB的脂肪酶水解比酶活最高达855.02、1239.40和210.47 U/g(以干细胞计);热SDS可有效抽提GS115/KFS-CALB上的Flo1p絮凝素,昆布多糖酶和氢氟酸吡啶可释放GS115/KNS-CALB上的α凝集素,而昆布多糖酶和温和碱可释放GS115/Pir1-CALB上的Pir1.

英文摘要:

In order to explore a stable and effective extraction method of cell wall proteins(CWPs) for the research on the cell wall proteome of Pichia pastoris and the related metabolic regulation of methanol,three kinds of yeasts,namely GS115/KFS-CALB with recombined non-covalently-bonded cell wall Flo1p protein flocculin,GS115/KNS-CALB with covalently-bonded cell wall α lectin and GS115/Pir1-CALB with recombined covelently-bonded cell wall Pir1 protein,were used to extract cell wall proteins using hot SDS,laminarinase,HF-pyridine and mild alkali.The results indicate that the three types of CWPs mentioned above have successfully displayed on the cell wall of Pichia pastoris,that the three tpyes of anchored proteins all have little effect on the cell growth but great effect on the expression of displayed enzyme when they are used to display the lipase,and that the specific hydrolase activity of lipase of GS115/KFS-CALB,GS115/KNS-CALB and GS115/Pir1-CALB are respectively up to 855.02,1239.40 and 210.47 U per gram of dry cells.It is also found that hot SDS is effective in releasing the CWPs Flo1p flocculin of GS115/KFS-CALB,that laminarinase and HF-pyridine are effective in releasing the CWPs α lectin of GS115/KNS-CALB,and that both laminarinase and mild alkali are effective in releasing the Pir1 proteins of GS115/Pir1-CALB.

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期刊信息
  • 《华南理工大学学报:自然科学版》
  • 北大核心期刊(2011版)
  • 主管单位:国家教育部科技司
  • 主办单位:华南理工大学
  • 主编:李元元
  • 地址:广州市天河区五山路华南理工大学17号楼
  • 邮编:510640
  • 邮箱:journal@scut.edu.cn
  • 电话:
  • 国际标准刊号:ISSN:1000-565X
  • 国内统一刊号:ISSN:44-1251/T
  • 邮发代号:46-174
  • 获奖情况:
  • 本学报荣获1996年国家教委系统优秀科技期刊二等奖...,1999年荣获全国优秀高校自然科学学报及教育部优秀...,2001年荣获广东省优秀期刊奖和广东省优秀科技期刊...,2004年获全国高校优秀科技期刊二等奖,2006年获首届教育部优秀科技期刊奖,2008年荣获第二届教育部优秀科技期刊奖
  • 国内外数据库收录:
  • 俄罗斯文摘杂志,美国化学文摘(网络版),荷兰文摘与引文数据库,美国工程索引,美国剑桥科学文摘,英国科学文摘数据库,中国中国科技核心期刊,中国北大核心期刊(2004版),中国北大核心期刊(2008版),中国北大核心期刊(2011版),中国北大核心期刊(2014版),中国北大核心期刊(2000版)
  • 被引量:22954