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酵母双杂交技术筛选与乙型脑炎病毒NS5相互作用的蛋白
  • ISSN号:0577-7402
  • 期刊名称:《解放军医学杂志》
  • 时间:0
  • 分类:R512.32[医药卫生—临床医学;医药卫生—内科学]
  • 作者机构:[1]兰州大学生命科学学院,兰州730000, [2]军事医学科学院微生物流行病研究所,病原微生物生物安全国家重点实验室,北京100071
  • 相关基金:国家自然科学基金(30970312,310000083)
中文摘要:

目的应用酵母双杂交技术筛选与乙型脑炎病毒NS5蛋白相互作用的宿主蛋白。方法构建表达乙型脑炎病毒NS5蛋白的诱饵质粒pSos-NS5,经自激活和毒性实验后对人脐静脉内皮细胞cDNA文库进行筛选,挑取37℃条件下在缺失亮氨酸和尿嘧啶培养基上生长的克隆,利用一对一酵母回复性杂交实验进行验证,然后测定阳性克隆插入片段序列,通过Blast分析确定可能与NS5相互作用的蛋白。结果构建的诱饵载体pSos-NS5对酵母宿主无毒性,且无自激活活性。经过筛选得到3个阳性克隆(10,11,4′6号克隆),经测序和Blast分析,初步确定4′6号克隆编码的TC21蛋白可能与NS5发生相互作用。结论经酵母双杂交技术筛选到一种可能与NS5蛋白具有相互作用的人类蛋白,为深入探讨乙型脑炎病毒NS5蛋白的生物学功能奠定了基础。

英文摘要:

Objective To screen possible human proteins that interact with the non-structural protein 5(NS5) of Japanese encephalitis virus(JEV) by yeast two-hybrid system.Methods The bait plasmid pSos-NS5 carrying JEV NS5 gene was first constructed and transformed to yeast cells,and then validated by the self-activation and toxicity assay.Then,a human umbilical vein endothelial cells cDNA library was used for screening with the bait plasmid pSos-NS5,and positive clones were selected based on nutritional requirements(Leucine and Uracil) and temperature change,and verified by one to one back-hybridization.Finally,the plasmids from the positive clones were sequenced and analyzed by Blast with sequences from GenBank.Results The bait plasmid pSos-NS5 was successfully constructed and confirmed to be no self-activation activity and toxicity to the host yeast cells.Three positive clones(10,11,and 4’6) were then selected from the human umbilical vein endothelial cells cDNA library with the bait plasmid pSos-NS5.Then,the plasmid from clone 4’6 was sequenced and BLAST analysis within GenBank showed that the sequences were highly homologous to the TC21 gene.Finally,these data indicated TC21 protein might be the putative candidate protein that interacted with the NS5 protein of JEV.Conclusion A candidate host protein has been identified by the yeast two-hybrid system,which will be helpful for understanding the biological function of NS5 of JEV,and further research should be warranted in the future.

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期刊信息
  • 《解放军医学杂志》
  • 中国科技核心期刊
  • 主管单位:中国人民解放军总后勤部卫生部
  • 主办单位:人民军医出版社
  • 主编:
  • 地址:北京市100036信箱188分箱
  • 邮编:100036
  • 邮箱:mjcpla@pmmp.com.cn
  • 电话:010-51927306
  • 国际标准刊号:ISSN:0577-7402
  • 国内统一刊号:ISSN:11-1056/R
  • 邮发代号:2-74
  • 获奖情况:
  • 全军医学期刊质量评比优秀期刊奖,北京市全优期刊奖,中国科学引文数据库来源期刊
  • 国内外数据库收录:
  • 俄罗斯文摘杂志,美国化学文摘(网络版),波兰哥白尼索引,荷兰文摘与引文数据库,荷兰医学文摘,日本日本科学技术振兴机构数据库,中国中国科技核心期刊,中国北大核心期刊(2004版),中国北大核心期刊(2008版),中国北大核心期刊(2011版),中国北大核心期刊(2014版),瑞典开放获取期刊指南,中国北大核心期刊(2000版)
  • 被引量:30614