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Alternative method for site-directed mutagenesis of complex polyketide synthase in Streptomyces albus JA3453
  • ISSN号：1672-9145
  • 期刊名称：《生物化学与生物物理学报：英文版》
  • 时间：0
  • 分类：Q55[生物学—生物化学]
  • 作者机构：[1]Laboratory of Microbial Metabolism and College of Life Sciences and Biotechnology, Shanghai Jiaotong University, Shanghai 200030,China, [2]Division of Pharmaceutical Sciences,University of Wisconsin, Madison, Wisconsin 53705, USA, [3]National Cooperative Drug Discovery Group of University of Wisconsin, University of Wisconsin, Madison, Wisconsin 53705, USA, [4]Department of Chemistry, University of Wisconsin, Madison, Wisconsin 53705, USA
  • 相关基金：This study was supported by the grants from the ＂973 Program＂ of the Ministry of Science and Technology （No. 2003CBl14205）, the National Natural Science Foundation of China （No, 30470941）, and the Shanghai Municipal Council of Science and Technology （No, IMJC14058）; Acknowledgements We thank the Analytical Instrumentation Center of the School of Pharmacy, University of Wisconsin （Madison, USA） for support in obtaining MS and HPLC data, the John Innes Centre （Norwich, UK） for providing the REDIRECT Technology kit, Werner F. Fleck （Hans Knoell Institute for Natural Product Research, Jena, Germany） for providing the S. albus JA3453 strain, and John K. Heath, University of Birmingham （Birmingham, UK） for providing plasmids pKOV-Kan and pDF25.
作者： Danfeng Song[1], Jane Coughlin[2], Jianhua Ju[2], Xiufen Zhou[1], Ben Shen[2,3,4], Chunhua Zhao[1], Zixin Deng[1]
关键词： 链霉菌, 酮合酶, 生物化学, 选择法, oxazolomycin, polyketide synthase, RecAmediated homologous recombination, Streptomyces, tandem ketosynthase
中文摘要：

oxazolomycin (OZM ) 的顺序分析从 Streptomyces albus JA3453 的 biosynthetic 基因簇揭示了基因， ozmH，编码混合 polyketide 和 non-ribosomal 肽酶。双人脚踏车 ketosynthase (KS ) 领域(KS 10-1 和 KS 10-2) 与已知的 KS 被描绘，他们出现重要相同。用包含调停 RecA 的相应再结合，否定选择标记 sacB 基因，和温度敏感的复制的一个其他的方法，催化三个一组氨基酸半胱氨酸的指导地点的 mutagenesis 在每双人脚踏车 KS 领域 totest 被执行他们在 OZM 生合成玩的功能。产生变异的紧张的 HPLC 团 spectrometry 分析证明 KS 10-2 为 OZM 生合成是必要的，但是 KS 10-1 不是不可缺少的并且可能用作一个冗余的领域。这些结果在复杂 polyketide synthase 证实了一个额外的领域的存在。

英文摘要：

Sequence analysis of oxazolomycin （OZM） biosynthetic gene cluster from Streptomyces albus JA3453 revealed a gene, ozmH, encoding a hybrid polyketide and non-ribosomal peptide enzyme. Tandem ketosynthase （KS） domains （KS10-1 and KS10-2） were characterized and they show significant homology with known KSs. Using an alternative method that involves RecA-mediated homologous recombination, the negative selection marker sacB gene, and temperature-sensitive replications, site-directed mutagenesis of the catalytic triad amino acid cysteines were carried out in each of the tandem KS domains to test the function they play in OZM biosynthesis. HPLC-mass spectrometry analysis of the resulting mutant strains showed that KS10-2 is essential for OZM biosynthesis but KS10-1 is not indispensable and might serve as a ＂edundant＂ domain. These results confirmed the existence of an ＂extra domain＂ in complex polyketide synthase.

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期刊信息
  • 《生物化学与生物物理学报：英文版》
  • 北大核心期刊（2004版）
  • 主管单位:
  • 主办单位:中国科学院上海生物化学研究所
  • 主编：
  • 地址：上海岳阳路319号
  • 邮编：200031
  • 邮箱：abbs@sibs.ac.cn
  • 电话：021-54920956 54920955
  • 国际标准刊号：ISSN：1672-9145
  • 国内统一刊号：ISSN：31-1940/Q
  • 邮发代号:4-210
  • 获奖情况:
  • 国内外数据库收录:
  • 美国化学文摘（网络版）,英国农业与生物科学研究中心文摘,荷兰文摘与引文数据库,美国生物医学检索系统,美国剑桥科学文摘,美国科学引文索引（扩展库）,美国生物科学数据库,英国动物学记录,日本日本科学技术振兴机构数据库,中国中国科技核心期刊,中国北大核心期刊（2004版）,英国英国皇家化学学会文摘,中国北大核心期刊（2000版）
  • 被引量:5851