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应用原生质体融合技术构建纤维素发酵产油脂菌株的试验
  • ISSN号:0257-4799
  • 期刊名称:《蚕业科学》
  • 时间:0
  • 分类:S888.2[农业科学—特种经济动物饲养;农业科学—畜牧兽医]
  • 作者机构:山东农业大学林学院,山东泰安271018
  • 相关基金:资助项目:国家自然科学基金项目(No.31200450),中国博士后科学基金项目(No.2013M541944),山东省现代农业产业技术体系蚕桑产业创新团队建设项目(No.SDAIT-18-05),现代农业产业技术体系建设专项(No.CARS-22).
中文摘要:

原生质体融合(protoplast fusion)技术是将遗传性状不同的亲本原生质体融合杂交的基因重组技术。从健康桑树根系中分离到一株产油脂内生真菌MOD-1,采用酶解方法制备内生真菌MOD-1和产纤维素酶菌株绿色木霉TP4、T44及长柄木霉TL的原生质体,获得4个菌株的原生质体产量分别为7.02×10^6个/m L、4.43×10^6个/m L、6.35×10^6个/m L和4.35×10^6个/m L,再生率分别为4.90%、3.26%、4.51%和4.12%。优化亲本原生质体灭活条件为:MOD-1菌株经紫外线照射10 min或加热15 min,TP4菌株经紫外线照射25 min或加热20 min,T44菌株经紫外线照射25 min或加热25 min,TL菌株经紫外线照射30 min或加热25 min。在上述条件下各亲本原生质体的灭活率均达到100%。将灭活的MOD-1菌株原生质体分别与不同方式灭活的TP4、T44、TL菌株原生质体融合,经初筛和复筛获得了一株兼具MOD-1与TP4双亲优良性状的融合菌株MP-1,其油脂产量、油脂含量(质量分数)分别为0.082 4 g/L、14.46%,显著高于亲本菌株MOD-1。融合菌株MP-1传代培养10代后,油脂产量与油脂含量的遗传稳定性分别达到92.84%和95.00%。

英文摘要:

Protoplast fusion is a kind of gene recombination technology which fuses parental protoplasts that have differ- ent genetic traits to achieve the purpose of hybridization. A lipid-producing endophytic fungus MOD-1 was isolated from healthy mulberry root. Using enzymatic hydrolysis method, protoplasts of mulberry endophytic oleaginous Macrophomina phaseolina MOD-1, cellulase-producing strains including Trichoderma viride TP4, T44 and Trichoderma Iongibrachiatum TL were obtained. The protoplast yield of MOD-1, TP4, T44 and TL strains reached 7. 02×10^6 mL^-1, 4. 43×10^6 mL^-1, 6.35×10^6 mL^-1 and 4.35×10^6 mL^-1 respectively, and the regeneration rate reached 4.90%, 3. 26%, 4.51% and 4. 12% respectively. The optimized inactivation conditions of parental protoplasts were as follows: MOD-1, UV-irradiation for 10 rain or heat-inactivation for 15 min; TP4, UV-irradiation for 25 min or heat-inactivation for 20 min; T44, UV-irradiation for 25 min or heat-inactivation for 25 min; TL, UV-irradia- tion for 30 min or heat-inactivation for 20 min. Under these conditions, the inactivation rate of parental protoplasts all reached 100%. MOD-1 inactivated protoplast was fused with T44, TP4 or TL inactivated protoplast by different ways, and a fusant MP-1 from MOD-1 and TP4 was ob- tained through primary and secondary screening. Its lipid yield and lipid content (mass fraction) achieved to 0. 082 4 g/L and 14. 46%, being significantly higher than those of parental strains. The genetic stability of lipid yield and lipid content reached 92.84% and 95.00% respectively after 10 generations of subculture.

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期刊信息
  • 《蚕业科学》
  • 北大核心期刊(2011版)
  • 主管单位:中国科学技术协会
  • 主办单位:中国蚕学会 中国农业科学院蚕业研究所
  • 主编:郭锡杰
  • 地址:江苏省镇江市四摆渡中国农业科学院蚕业研究所
  • 邮编:212018
  • 邮箱:CYKE@chinajournal.net.cn
  • 电话:0511-85616835
  • 国际标准刊号:ISSN:0257-4799
  • 国内统一刊号:ISSN:32-1115/S
  • 邮发代号:28-23
  • 获奖情况:
  • 中国科协优秀科技期刊,全国农业学会优秀期刊
  • 国内外数据库收录:
  • 美国化学文摘(网络版),日本日本科学技术振兴机构数据库,中国中国科技核心期刊,中国北大核心期刊(2004版),中国北大核心期刊(2008版),中国北大核心期刊(2011版),中国北大核心期刊(2014版)
  • 被引量:7742