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细粒棘球绦虫转基因植物载体重组pBI—Eg95质粒构建及鉴定
  • ISSN号:2095-4255
  • 期刊名称:《中华地方病学杂志》
  • 时间:0
  • 分类:R392.2[医药卫生—免疫学;医药卫生—基础医学] R383.33[医药卫生—医学寄生虫学;医药卫生—基础医学]
  • 作者机构:[1]重庆医科大学附属第一医院传染病寄生虫病研究所,400016
  • 相关基金:国家自然科学基金(30671835)
中文摘要:

目的构建并鉴定细粒棘球绦虫(Eg)转基因植物载体重组pBI—Eg95质粒。方法从细粒棘球蚴包囊中分离原头节,经超声粉碎后抽提总RNA,反转录成cDNA,设计合成引物,以cDNA为模板,通过PCR从cDNA中扩增出目的基因Eg95,经电泳及测序鉴定后。将该基因定向克隆到植物表达载体pBI121中构建pBI—Eg95重组质粒,电穿孔转化根癌农杆菌(At)LBA4404株;从转化的At阳性株中抽提质粒进行双酶切和以抽提的质粒为模板进行PCR鉴定。结果RT—PCR扩增出1条约471bp的特异性条带.DNA序列分析与GenBank已知的序列同源性为100%,从转化的At中抽提的质粒,双酶切及PCR测定的结果与预期相符。结论成功构建了细粒棘球绦虫转基因植物载体重组pBI—Eg95质粒,为进一步构建细粒棘球绦虫转基因植物疫苗奠定了基础。

英文摘要:

Objective To construct and identify the transgenic plant vector recombinant pBI-Eg95 plasmid of Echinococcus granulosus. Methods Total RNA was extracted from hydatid cyst protoscoleces of Echinococcus granulosus after sonication. A couple of specific primers were designed on the basis of known sequences of Eg95 gene. The desired gene was amplified by PCR technique from the cDNA, and then was cloned into the plant expression vector pBI121 to construct the recombinant pBI-Eg95 plasmid. The recombinant plasmid was electroporated into Agrobacterium tumefaciens (At) LBA4404 strain. The positive recombinant clones were confirmed by restriction endonuclease digestion and characterized by PCR. Results For RT-PCR, a specific band around 471 bp was amplified. The result of DNA sequencing of Eg95 showed the identity with the published sequence. The same band was obtained by restriction endonuclease digestion and PCR from the plasmids of positive recombinant At(rAt). Conclusions The recombinant pBI-Eg95 plasmid was successfully constructed, and it provides the basis to further research of the transgenic plant vaccine of Echinococcus granulosus.

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期刊信息
  • 《中华地方病学杂志》
  • 中国科技核心期刊
  • 主管单位:中华人民共和国卫生部
  • 主办单位:中华医学会 哈尔滨医科大学
  • 主编:
  • 地址:哈尔滨市南岗区保健路157号
  • 邮编:150081
  • 邮箱:cje2005@163.com
  • 电话:0451-86675924
  • 国际标准刊号:ISSN:2095-4255
  • 国内统一刊号:ISSN:23-1583/R
  • 邮发代号:14-30
  • 获奖情况:
  • 2000年获黑龙江优秀科技期刊奖
  • 国内外数据库收录:
  • 美国化学文摘(网络版),英国农业与生物科学研究中心文摘,波兰哥白尼索引,荷兰文摘与引文数据库,荷兰医学文摘,美国剑桥科学文摘,日本日本科学技术振兴机构数据库,中国中国科技核心期刊,中国北大核心期刊(2004版),中国北大核心期刊(2008版),中国北大核心期刊(2011版),中国北大核心期刊(2014版)
  • 被引量:1230