目的建立同时测定玉屏风汤中黄芪甲苷、白术内酯-I和升麻苷含量的高效液相色谱-质谱法(HPLC-MS)。方法采用HederaODS-2(2.0mm×150mm,5μm)色谱柱,流动相为甲醇:水(68:32),流速为0.2ml/min;电喷雾电离(ESI^+),选择性离子监测(SIM)质荷比为807.50、287.05、469.05的离子对,内标为替米沙坦。结果3种成分含量的线性范围和相关系数分别为:黄芪甲苷0.01562~0.5μg/ml(r=0.9997),白术内酯-10.005859-0.1875μg/ml(r=0.9997),升麻苷0.03125-8μg/ml(r=0.9965)。平均回收率分别为:95.47%、101.94%和103.70%,RSD分别为:2.47%、2.20%和1.64%。结论本研究建立的HPLC-MS法方便、快捷、稳定,可同时测定玉屏风汤中3种主要成分的含量,结果准确可靠,可为玉屏风汤体内药动学研究提供依据。