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伪旋毛虫肌幼虫cDNA表达文库的构建及筛选
  • ISSN号:1002-2694
  • 期刊名称:《中国人兽共患病学报》
  • 时间:0
  • 分类:R383.1[医药卫生—医学寄生虫学;医药卫生—基础医学]
  • 作者机构:[1]人兽共患病教育部重点实验室,吉林大学人兽共患病研究所,长春130062, [2]UMR 956 INRA-AFSSA-ENVA-PUVM, Maison-Alfort, Paris 94703, France
  • 相关基金:国家863计划项目(2006AA022451);国家自然科学基金(30771885,30600276);国际科学基金(B/352521)
中文摘要:

目的获取伪旋毛虫(Trichinella pseudospiralis)肌幼虫时期抗原性基因。方法利用XZAP载体构建伪旋毛虫肌幼虫cDNA表达文库;以感染伪旋毛虫60天后的猪血清为抗体探针。对伪旋毛虫肌幼虫cDNA文库进行免疫学筛选,对筛选出的强反应原性克隆进行测序,利用相关分子生物学软件进行序列分析。结果构建的伪旋毛虫cDNA表达文库的库容量为0.55×10^6pfu,重组率为95.6%,扩增后文库滴度为1.2×10^10pfu/mL。从2.0×10^5个重组噬菌体筛选获得阳性克隆27个。序列分析结果表明这27个阳性克隆共编码7种cDNA分子,其编码的类似蛋白分别为伪旋毛虫Tp21kDa蛋白、伪旋毛虫Tp28kDa蛋白、蛋白酶体激活因子亚单位(Proteasome activator subunit)类蛋白、Nudix水解酶(Nudix hydrolyase)类蛋白、凝集因子(Condensin)类蛋白、尿嘧啶糖基化酶(uracil glycosylase)类蛋白和一个未知蛋白。结论获得两个反应原性较强且高拷贝的抗原基因,其分别编码Tp21kDa蛋白及蛋白酶体激活因子亚单位。

英文摘要:

The cDNA expression library for muscle larvae of Trichinella pseudospiralis was constructed with lambda ZAP vector and screened using the swine serum from T. pseudospiralis 60 days post infection(60 dpi) as the antibody probe. Meanwhile, the positive clones screened were sequenced and the sequences were analyzed by means of the related softwares of bioinformatics. It was found that the size of the primary library was 0.55 × 10^6 pfu with a recombination rate of 95.6% and the titer of the amplified library was 1.2 × 10^10. From 2 × 10^5 recombinant clones of the cDNA library, 27 positive clones were obtained and these clones encoded 7 unique cDNA molecules coding for Tp21kDa and Tp28kDa proteins of T. pseudospiralis, proteasome activator subunit, nudix hydrogenase- like protein, condensing-like protein, uracil glycosylase-like protein and an unknown protein.

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期刊信息
  • 《中国人兽共患病学报》
  • 北大核心期刊(2011版)
  • 主管单位:中国科学技术协会
  • 主办单位:中国微生物学会
  • 主编:严延生
  • 地址:福州市津泰路76号
  • 邮编:350001
  • 邮箱:rsghb@fjcdc.com.cn
  • 电话:0591-87552018
  • 国际标准刊号:ISSN:1002-2694
  • 国内统一刊号:ISSN:35-1284/R
  • 邮发代号:34-46
  • 获奖情况:
  • 中国基础医学核心期刊,中国生物医学核心期刊,中国科学引文数据库列为来源期刊及统计源,中国期刊方阵“双效”期刊
  • 国内外数据库收录:
  • 俄罗斯文摘杂志,美国化学文摘(网络版),英国农业与生物科学研究中心文摘,英国动物学记录,日本日本科学技术振兴机构数据库,中国中国科技核心期刊,中国北大核心期刊(2008版),中国北大核心期刊(2011版),中国北大核心期刊(2014版)
  • 被引量:9000