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棉铃虫细胞色素P450 CYP6B7基因的克隆与融合表达
  • ISSN号:0454-6296
  • 期刊名称:《昆虫学报》
  • 时间:0
  • 分类:Q965.9[生物学—昆虫学]
  • 作者机构:[1]中国科学院动物研究所,农业虫害鼠害综合治理研究国家重点实验室,北京100080, [2]西北农林科技大学农药研究所,陕西杨凌712100
  • 相关基金:国家自然科学基金项目(30370946.30270885)
中文摘要:

细胞色素P450 CYP687被推测与棉铃虫Helicoverpa armigem对拟除虫菊酯类杀虫剂的抗性有关,但至今尚无CYP687参与杀虫剂代谢方面的直接证据。为揭示CYP687的代谢功能,作者以棉铃虫幼虫基因组DNA为模板,以CYP687基因设计特异性引物,扩增出包含321bp内含子的CYP687基因。用反向PCR的方法消除内含子,获得包含完整的CYP687基因的开放阅读框。将CYP687基因与pMAL-c2X载体连接,并转化E.coliTB1细胞,在IPTG诱导下,CYP687能与载体基因编码的麦芽糖结合蛋白(MBP)在大肠杆菌中融合表达,表达产物经直链淀粉(amylose)柱亲和层析分离洗脱后,得到SDS-PAGE电泳纯的融合蛋白。

英文摘要:

Although it has been suggested that CYP6B7 in the cotton bollworm, Helicoverpa armigera, is probably responsible for resistance to pyrethroids, there is no direct evidence showing that CYP6B7 is involved in the metabolism of pyrethroid pesticides. To explore the function of CYP6B7 gene, we attempted to produce CYP6B7 enzyme through heterologous expression of the CYP6B7 gene. The open reading frame of CYP6B7 gene was isolated by PCR with genomic DNA as the template and using a pair of CYP6B7 gene-specific primers, followed by reverse PCR aiming at deleting the intron sequence of 321 bp. A fusion plasmid (CYP6B7-pMAL) was constructed by inserting the CYP6B7 gene into the BamH Ⅰ -Sal Ⅰ restriction sites of pMAL-c2X vector. CYP6B7-pMAL plasmid was transformed into E. coli TB1. A fusion protein (CYP6B7 fused with maltose binding protein) was expressed after induction by IPTG. SDS-PAGE pure fusion protein was isolated with an amylose column.

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期刊信息
  • 《昆虫学报》
  • 北大核心期刊(2011版)
  • 主管单位:中国科学院
  • 主办单位:中国昆虫学会 中国科学院动物研究所
  • 主编:黄大卫
  • 地址:北京东中关村中国科学院动物研究所
  • 邮编:100101
  • 邮箱:kcxb@ioz.ac.cn
  • 电话:010-64807173 010-64807099
  • 国际标准刊号:ISSN:0454-6296
  • 国内统一刊号:ISSN:11-1832/Q
  • 邮发代号:2-153
  • 获奖情况:
  • 国家期刊方阵“双百期刊”
  • 国内外数据库收录:
  • 俄罗斯文摘杂志,美国化学文摘(网络版),英国农业与生物科学研究中心文摘,美国剑桥科学文摘,美国生物科学数据库,英国动物学记录,日本日本科学技术振兴机构数据库,中国中国科技核心期刊,中国北大核心期刊(2004版),中国北大核心期刊(2008版),中国北大核心期刊(2011版),中国北大核心期刊(2014版),中国北大核心期刊(2000版)
  • 被引量:16190