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白细胞介素17在人视网膜血管内皮细胞增生、迁移及凋亡中的作用
  • ISSN号:1005-1015
  • 期刊名称:中华眼底病杂志
  • 时间:2015.1
  • 页码:67-71
  • 分类:R774.1[医药卫生—眼科;医药卫生—临床医学]
  • 作者机构:[1]苏州大学附属第一医院眼科,215006
  • 相关基金:国家自然科学基金(30972712);国家自然科学基金(81200727);江苏省医学重点人才项目(RC2011104);苏州市科技计划项目(SYS201448);苏州大学博士研究生学术新人奖子项目(5832001313)
  • 相关项目:IL-17F在实验性新生血管性眼病中的作用和机制的研究
中文摘要:

目的 观察白细胞介素17(IL-17)在人视网膜血管内皮细胞(HREC)增生、迁移及凋亡中的作用.方法 体外培养HREC,并取对数生长期的细胞进行实验.采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、蛋白免疫印迹法(Western blot)检测HREC中IL-17受体(IL-17R)基因和蛋白的表达.以不含IL-17的培养液培养细胞作为对照组.以浓度50、100、200、500 μg/L的1L-17培养液干预HREC,采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)增生分析法检测不同浓度IL-17对HREC细胞增生的作用,细胞划痕法测定不同浓度IL-17对HREC细胞迁移的影响.以浓度200 μg/L的IL-17培养液干预HREC,采用流式细胞技术检测1L-17对HREC细胞凋亡的影响.以1、2 mg/L的IL-17培养液干预HREC,应用RT-PCR检测HREC中碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(Caspase3)、凝血酶敏感蛋白-1(TSP-1)的mRNA表达,Western blot检测细胞中Caspase-3的蛋白表达.结果 HREC中存在IL-17R的基因和蛋白表达.CCK-8增生分析法结果显示,随着IL-17培养液的浓度不断增加,吸光度[A,旧称光密度(OD)]值也呈上升趋势.与对照组比较,200、500 μg/L干预组A值明显升高,差异均有统计学意义(t=-3.235、-6.276,P=0.032、0.000).细胞划痕法检测结果显示,干预12、24 h时,100 μg/L干预组(t=-3.551、-2.849,P=0.006、0.019)、200μg/L干预组(t=-10.347、-4.519,P=0.000、0.001)、500 μg/L干预组(t=-3.541、-2.607,P=0.008、0.036)HREC迁移距离均明显增加,差异有统计学意义.流式细胞技术检查结果显示,200 μg/L干预组细胞凋亡比例较对照组明显下调,差异有统计学意义(t=5.682,P=0.047).RT-PCR及琼脂糖电泳结果显示,经IL-17干预后HREC中bFGF的mRNA表达水平呈升高趋势,而Caspase-3和TSP-1的mRNA表达水平呈下调趋势.Western blot检测结果显示,经IL-17干预后HREC中Caspase-3蛋白表达呈下调趋势.结论 IL-17能促进HREC增生、迁移,并?

英文摘要:

Objective To address the effect and mechanism of interleukin 17 (IL-17) on the proliferation,migration and apoptosis of human retinal vascular endothelial cells (HREC).Methods IL-17 receptor (IL-17R) mRNA and protein expression in human retinal vascular endothelial cells (HREC) were quantified by reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) and Western blot.Cell proliferation of HREC was examined using CCK-8 assay in the presence of different concentrations of IL-17.Cell migration of HREC was detected using wound scratch assay.Flow cytometry was used to test the effect of IL-17 on the apoptosis of HREC.The effects of IL-17 on HREC expression of basic fibroblast growth factor (bFGF),Caspase-3 and thrombospondin-1 (TSP-1) were quantified by reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR).The effect of IL-17 on HREC expression of Caspase-3 was examined using Western blot.Results IL-17 receptor (IL-17R) expressed in HREC as quantified by RT-PCR and Western blot.The proliferation of HREC in the presence of IL-17 was promoted in a dosage-dependent manner (t=-3.235,-6.276 ;P=0.032,0.000).Wound scratch assay showed a significant increase in the migrated distance of HREC with IL-17 stimulation under the concentration of 100 μg/L(t=3.551,-2.849; P=0.006,0.019),200 μg/L(t=-10.347,-4.519; P=0.000,0.001) and 500 μg/L (t=-3.541,-2.607; P=0.008,0.036).The intervention of 200 μg/L IL-17 can effectively inhibit the apoptosis of HREC,compared with the control group using flow cytometry (t=5.682,P=0.047).RT-PCR results showed that IL-17 can promote the expression of bFGF and inhibit the expression of Caspase-3 and TSP-1.Western blot result also showed that IL-17 can suppress the protein expression of Caspase-3.Conclusion The mechanism of IL-17 promoting proliferation,migration but suppress apoptosis of HREC may via regulating the expression of bFGF and Caspase-3.

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期刊信息
  • 《中华眼底病杂志》
  • 中国科技核心期刊
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  • 国际标准刊号:ISSN:1005-1015
  • 国内统一刊号:ISSN:51-1434/R
  • 邮发代号:62-73
  • 获奖情况:
  • 1997看中国科协优秀科技期刊三等奖,2000年中华医学会杂志评比二等奖,2000年四川省优秀期刊二等奖
  • 国内外数据库收录:
  • 美国化学文摘(网络版),日本日本科学技术振兴机构数据库,中国中国科技核心期刊,中国北大核心期刊(2004版),中国北大核心期刊(2008版),中国北大核心期刊(2011版),中国北大核心期刊(2014版)
  • 被引量:10450