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日本血吸虫精氨酸酶新基因的鉴定及作为疫苗的保护性研究
  • ISSN号:1000-7423
  • 期刊名称:《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》
  • 时间:0
  • 分类:R392.11[医药卫生—免疫学;医药卫生—基础医学] R532.21[医药卫生—临床医学;医药卫生—内科学]
  • 作者机构:[1]广州医学院病原生物学教研室,广州510182, [2]中山大学基础医学院病原生物学教研室,广州510180
  • 相关基金:国家自然科学基金(30070683);广东“211工程”重点建设项目(No.98169)
中文摘要:

目的 识别和鉴定日本血吸虫(Sj)精氨酸酶(ARG)新基因,并研究纯化的重组SjARG对Sj感染小鼠的保护性。方法 通过巢式PCR,从日本血吸虫尾蚴cDNA文库特异扩增ARG基因cDNA序列的5′端,并用生物信息学进行鉴定;将ARG的完整编码序列(CDS)克隆到pET30a(+)载体,表达并纯化表达产物后,以鸟氨酸-茚三酮法鉴定酶活性;用蛋白质印迹法(Western blotting)比较重组ARG蛋白与Sj天然ARG蛋白的免疫学特性,间接免疫荧光法对ARG在Sj成虫中的分布进行组织定位;用纯化重组ARG蛋白免疫小鼠(PBS和SjGST作对照),Sj尾蚴攻击感染后,检测SjARG作为疫苗的免疫保护力。结果 扩增并鉴定SjARG基因的完整CDS长为1095bp;重组SjARG具有酶活性。并具有与Sj天然ARG蛋白相同的免疫学特性;ARG定位于Sj成虫的肠壁和生殖器官。重组SjARG蛋白免疫后的减虫率和减卵率分别为55.8%和48.8%。SjGST蛋白免疫后的减虫率和减卵率分别为28.6%和6.89%。结论 获取并鉴定了SjARG新基因;SiARG比SjGST具有更高的疫苗保护性。

英文摘要:

Objective To recognize and identify the arginase (ARG) gene of Schistosomajaponicum(Sj), and to study its protection potential as a vaccine. Methods The 5′-end of the ARG gene from the Sj cercariae cDNA library was amplified by nested-PCR and the sequence was identified by bioinfonnatics. The complete coding sequence(CDS) was cloned into pET30a (+) vector, and a recombinant SjARG protein (rSjARG) was expressed, purified and used to raise antibodies. ARG's activity as an enzyme was tested by ornithine-ninhydrin reaction. Western blotting was used to compare the immunologic characteristics of rSjARG with that of the native one in Sj adult worm. Indirect immunofluorescence assay was used to immunolocalize it. For evaluating the protection potential of rSjARG, mice were immunized by the recombinant protein and challenged by cercariae of japonicum. Results The CDS length of the SjARG novel gene was identified as 1095bp rSjARG showed enzyme activity and the same immunologic characteristics with the native arginase in adult worm. SjARG located in the genital organ and gut of both sexes. The worm reduction rate and egg reduction rate in rSjARG group were 55.8% and 48.8% respectively, higher than that of the rSj26GST group (28.6% and 6.89% respectively). Conclusion SjARG gene was identified, which shows a higher protection than the Sj26GST.

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期刊信息
  • 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》
  • 中国科技核心期刊
  • 主管单位:中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会
  • 主办单位:中华预防医学会 中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所
  • 主编:汤林华
  • 地址:上海市瑞金二路207号右楼3F
  • 邮编:200025
  • 邮箱:zgjsczz@vip.163.net
  • 电话:021-54562376
  • 国际标准刊号:ISSN:1000-7423
  • 国内统一刊号:ISSN:31-1248/R
  • 邮发代号:4-362
  • 获奖情况:
  • 1997年被中华预防医学会评为先进编辑部,2000年荣获中华预防医学会系列杂志优秀期刊一等奖,2001年荣获中华预防医学会2001年优秀期刊二等奖,2003年荣获2001-2002年中华预防医学会系列杂志优...,2009年获“百种中国杰出学术期刊”奖,2010年荣获上海市科技期刊审计优秀奖,2011年遴选为第二届“中国精品科技期刊”,获第三届“RCCSE中国权威学术期刊”,2013年荣获国家卫生计生委首届优秀期刊,2013年荣获第四届华东地区优秀期刊奖
  • 国内外数据库收录:
  • 美国化学文摘(网络版),英国农业与生物科学研究中心文摘,荷兰文摘与引文数据库,美国生物医学检索系统,英国动物学记录,日本日本科学技术振兴机构数据库,中国中国科技核心期刊,中国北大核心期刊(2004版),中国北大核心期刊(2008版),中国北大核心期刊(2011版),中国北大核心期刊(2014版),中国北大核心期刊(2000版)
  • 被引量:11792