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35S驱动Pib基因启动区和编码区的转基因初步分析
  • ISSN号:0253-9772
  • 期刊名称:《遗传》
  • 时间:0
  • 分类:Q523.8[生物学—生物化学] S511[农业科学—作物学]
  • 作者机构:[1]南京农业大学作物遗传与种质创新国家重点实验室,南京210095
  • 相关基金:国家自然科学基金(编号:30571044),江苏省高科技项目(编号:BG2001305)和长江学者和创新团队发展计划资助 致谢:日本国立农业生物资源研究所Masahiro Yano教授惠赠含Pib基因的10.3kb克隆片段和双元表达载体pPZP2Ha3(+/-).稻瘟病生理小种ZD1和ZG1由江苏省农科院植保所周益军研究员惠赠.
中文摘要:

将包含Pib基因启动区及下游完整编码区的9.9kbDNA片段克隆到双元载体pPZP2Ha3(+)中,构建了35S驱动的正义表达载体pNAR701(20.3kb);同时将Pib基因编码区6986~9392bp之间的DNA片段,克隆到双元载体pPZP2Ha3(-)中,构建了35S驱动的反义表达载体pNAR703(12.8kb);用农杆菌介导法转入中感稻瘟病水稻品种R109中。PCR、Southern blot鉴定以及转基因T0代种子的潮霉素抗性鉴定证明,目的基因已经整合到R109基因组中,并能在后代稳定遗传。Northern blot分析表明含有启动区及下游完整编码的Pib基因片段在35S驱动下能够在转基因后代中表达。对T1代苗期转基因植株和分蘖期离体叶片进行抗稻瘟病初步分析,结果显示pNAR701转基因植株对稻瘟病生理小种ZD1和ZG1的抗性较对照增强,而转反义片段的pNAR703转基因植株对稻瘟病的抗性较对照减弱。

英文摘要:

The promoter region and intact coding region of Pib gene (9.9 kb) was inserted into the downstream of CaMV 35S promoter in a binary vector pPZP2Ha3(+), resulting a plasmid pNAR701. And a fragment of Pib gene from 6 986 to 9 392 bp was placed into pPZP2Ha3(-) under the control of CaMV 35S promoter, producing an antisense expression vector pNAR703. These two recombined vectors were transferred into a blast medium susceptible rice cultivar R109 by an Agrobecterium-mediated method. Tests of PCR and Southern blotting for transgenic plants as well as the segregation of hygromycin resistance in T1 generation confirmed that the target DNA fragments were integrated into genome of R109 and hereditable. Northern blotting analysis showed the coding region of Pib gene double driven by 35S and its native promoter was able to transcript in T1 transgenic plants. Rice blast resistance test for T1 transgenic seedlings of 3-4 leaves stage and in vitro leaves in filleting stage showed that transgenic plants of pNAR701 were more resistant to blast race ZD1 and ZG1 than the wild type plants, but the resistance of antisense transgenic plants from pNAR703 was decreased compared to the controis.

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期刊信息
  • 《遗传》
  • 中国科技核心期刊
  • 主管单位:中国科学院
  • 主办单位:中国遗传学会
  • 主编:张永清
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  • 邮编:100101
  • 邮箱:yczz@genetics.ac.cn
  • 电话:010-64807669
  • 国际标准刊号:ISSN:0253-9772
  • 国内统一刊号:ISSN:11-1913/R
  • 邮发代号:2-810
  • 获奖情况:
  • 中国自然科学核心期刊,《CAJ-CD》执行优秀奖,2008年12月获“中国精品科技期刊”证书和北京市印...
  • 国内外数据库收录:
  • 美国化学文摘(网络版),英国农业与生物科学研究中心文摘,荷兰文摘与引文数据库,美国生物医学检索系统,美国生物科学数据库,日本日本科学技术振兴机构数据库,中国中国科技核心期刊,中国北大核心期刊(2004版),中国北大核心期刊(2008版),中国北大核心期刊(2011版),中国北大核心期刊(2014版),中国北大核心期刊(2000版)
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