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单管高灵敏度等温扩增技术快速检测甲型H1N1流感病毒
  • ISSN号:0253-3820
  • 期刊名称:《分析化学》
  • 时间:0
  • 分类:S855.3[农业科学—临床兽医学;农业科学—兽医学;农业科学—畜牧兽医]
  • 作者机构:[1]中国药科大学生命科学与技术学院,南京210009, [2]华东医学生物技术研究所,南京210002, [3]江苏省疾病预防控制中心微生物检验科,南京210009
  • 相关基金:国家自然科学基金(面上项目)(No.20975113); 江苏省科技支撑计划(社会发展)(No.BE2008623); 江苏省基础研究计划(自然科学基金)(No.BK2008067); 中央高校基本科研业务费专项资金青年项目(No.JKQ2009027)资助
中文摘要:

建立了单管逆转录环介导等温扩增法(RT-LAMP)快速检测甲型H1N1流感病毒的方法。针对甲型H1N1流感病毒的M基因和HA基因的保守区,设计了两组特异性引物,分别用于筛选甲型流感病毒及鉴定甲型H1N1流感病毒。对反应体系中的关键因素进行优化,反应结果可直接通过浊度或者SYBR GreenⅠ荧光进行判定。本方法最低可检测到10拷贝/管的甲型H1N1流感病毒。为验证方法的可行性,对30例临床样本进行了检测,与美国疾病控制与预防中心(CDC)的TaqMan方法进行对比,检测的灵敏度和特异性分别为92%和100%。本方法实现了单管快速检测甲型H1N1流感病毒,为甲型H1N1流感病毒的现场检测提供了新方法。

英文摘要:

A single-tube reverse transcription loop-mediated isothermal amplification(RT-LAMP) assay was developed for the detection of influenza A H1N1 virus.First,two sets of primers were designed based on the conserved regions of both the M gene and the HA gene for the screening of influenza A virus and the identification of influenza A H1N1 subtype.Optimization of RT-LAMP reaction at various conditions was then carried out by using the above primers.Positive reactions can be readily observed by a visual inspection based on the turbidity or SYBR Green Ⅰ fluorescence.The detection limit of this method was 10 RNA copies per reaction,higher than that of the Centers for Disease Control and Prevention TaqMan assay.To investigate the feasibility of the RT-LAMP assay,30 clinical specimens were tested,and the sensitivity and specificity were 92% and 100%,respec-tively,in comparison with the Centers for Disease Control and Prevention TaqMan assay.Therefore,the RT-LAMP assay proposed here is a perspective tool for the rapid screening of influenza A H1N1 virus at resource-limited areas.

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期刊信息
  • 《分析化学》
  • 北大核心期刊(2011版)
  • 主管单位:中国科学院
  • 主办单位:中国化学会 中国科学院长春应用化学研究所
  • 主编:杨秀荣
  • 地址:长春市人民大街5625号
  • 邮编:130022
  • 邮箱:fxhx@ciac.ac.cn
  • 电话:0431-85262017
  • 国际标准刊号:ISSN:0253-3820
  • 国内统一刊号:ISSN:22-1125/O6
  • 邮发代号:12-6
  • 获奖情况:
  • 1999获首届国家期刊奖,2000年获中国科学院优秀期刊特别奖,2001年入选中国期刊方阵“双高”期刊
  • 国内外数据库收录:
  • 俄罗斯文摘杂志,美国化学文摘(网络版),荷兰文摘与引文数据库,美国工程索引,美国乌利希期刊指南,美国剑桥科学文摘,美国科学引文索引(扩展库),日本日本科学技术振兴机构数据库,中国中国科技核心期刊,中国北大核心期刊(2004版),中国北大核心期刊(2008版),中国北大核心期刊(2011版),中国北大核心期刊(2014版),英国英国皇家化学学会文摘,中国北大核心期刊(2000版)
  • 被引量:52455