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日本血吸虫sjRAD23基因的克隆表达及基因重组抗原的免疫保护效果
  • ISSN号:1000-3061
  • 期刊名称:《生物工程学报》
  • 时间:0
  • 分类:Q78[生物学—分子生物学]
  • 作者机构:[1]上海师范大学生命与环境科学学院,上海200234, [2]中国农业科学院上海兽医研究所农业部寄生虫重点实验室,上海200241
  • 相关基金:国家自然科学基金(Nos.31172315,81271871); 上海市科技发展基金(No.12140902700); 中国农业科学院院长基金(No.2013JB18); 中国博士后科学基金(No.2012M510630)资助
中文摘要:

辐射敏感蛋白23具有核苷酸切除修复功能,在泛素蛋白酶体途径中起到重要作用。本研究利用PCR技术克隆了日本血吸虫辐射敏感蛋白23(Sj RAD23)编码的c DNA序列,成功获得Sj RAD23的基因序列,其ORF为1 053 bp。构建Sj RAD23基因重组表达质粒p ET28a(+)-Sj RAD23,并在大肠杆菌BL21中成功诱导表达,重组蛋白在上清和沉淀中都有存在。利用免疫组化技术检测该蛋白在虫体的分布情况,该蛋白广泛分布在日本血吸虫虫体被膜。用重组蛋白免疫BALB/c小鼠后,免疫小鼠血清中检测到较高水平的特异性Ig G、Ig G1和Ig G2a。Western blotting分析显示重组蛋白能够被日本血吸虫成虫可溶性抗原免疫小鼠血清所识别。用重组蛋白r Sj RAD23免疫结果与206佐剂对照组比较,r Sj RAD23在BALB/c小鼠中诱导了35.94%减虫率,40.59%肝脏减卵率。结果表明Sj RAD23具有作为疫苗候选分子的潜力。

英文摘要:

Radiation sensitive protein 23(RAD23) is a nucleotide excision repair(NER) protein that plays an important role in Ubiquitin-proteasome pathway(UPP). Schistosoma japonicum radiation sensitive protein23(Sj RAD23) c DNA sequences were amplified by PCR and cloned into p ET28a(+) vector to construct recombinant expression plasmid p ET28a(+)-Sj RAD23. The recombinant protein was expressed as both inclusion bodies and the supernatant in Escherichia coli BL21(DE3) cell. Immunofluorescence observation shows that Sj RAD23 was mainly distributed on the tegument surface of the worms. ELISA assay reveals that specific Ig G, Ig G1 and Ig G2 a antibodies could be detected in the sera of r Sj RAD23 immunized mice. Western blotting analysis shows that the recombinant Sj RAD23 could be recognized by serum specific to soluble adult worm antigen of S. japonicum. BALB/c mice vaccinated with r Sj RAD23 combined with 206 adjuvant revealed 35.94% worm reduction and 40.59% liver egg reduction when compared with that of the adjuvant control group.This study suggests that r Sj RAD23 has the potential as a vaccine against schistosome infection.

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期刊信息
  • 《生物工程学报》
  • 中国科技核心期刊
  • 主管单位:中国科学院
  • 主办单位:中国科学院微生物研究所 中国微生物学会
  • 主编:杨胜利
  • 地址:北京市朝阳区大屯路中国科学院微生物研究所内B401室
  • 邮编:100101
  • 邮箱:cjb@im.ac.cn
  • 电话:010-64807509
  • 国际标准刊号:ISSN:1000-3061
  • 国内统一刊号:ISSN:11-1998/Q
  • 邮发代号:82-13
  • 获奖情况:
  • 北京市优秀科技期刊期刊奖,中国科协首届优秀学术期刊奖,2000年中科院优秀科技期刊二等奖
  • 国内外数据库收录:
  • 俄罗斯文摘杂志,美国化学文摘(网络版),波兰哥白尼索引,荷兰文摘与引文数据库,美国生物医学检索系统,美国剑桥科学文摘,日本日本科学技术振兴机构数据库,中国中国科技核心期刊,中国北大核心期刊(2004版),中国北大核心期刊(2008版),中国北大核心期刊(2011版),中国北大核心期刊(2014版),中国北大核心期刊(2000版)
  • 被引量:18441