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功能性嗅觉受体的表达及其在仿生传感器中的应用
  • ISSN号:0023-074X
  • 期刊名称:《科学通报》
  • 时间:0
  • 分类:Q51[生物学—生物化学]
  • 作者机构:[1]浙江大学生物医学工程与仪器科学学院,生物传感器国家专业实验室,生物医学工程教育部重点实验室,杭州310027, [2]天津市第五中心医院检验科,天津300450, [3]浙江大学医学院生物化学与遗传学系,杭州310058
  • 相关基金:国家自然科学基金(31000448,31228008)和浙江省自然科学基金(LY13H1800002)资助
中文摘要:

嗅觉受体是一种表达在嗅上皮嗅觉受体神经元上的G蛋白偶联受体,可以选择性地与气味分子相结合激活细胞内信号转导通路,使嗅觉受体神经元产生动作电位,在气味识别过程中起重要作用.为了研究嗅觉受体蛋白与气味分子间的相互作用,本研究构建了线虫嗅觉受体ODR-10真核表达载体并将其异源表达于人胚胎肾细胞HEK-293中,通过细胞免疫荧光和Westernblot方法对表达效果进行了鉴定.利用细胞内钙离子浓度分析的方法检测表达有嗅觉受体ODR-10的细胞对其天然配体丁二酮的响应,结果证明异源表达的受体依然具有气味识别的功能.将嗅觉受体ODR-10作为传感器的敏感元件固定于石英晶体微天平传感器上,构成质量敏感型气体传感器,该传感器可以检测丁二酮气体,具有很高的灵敏度和特异性,在一定浓度范围内具有线性响应特性.所有结果表明,在异源细胞系统中表达的ODR-10受体蛋白仍具有特异性识别其天然配体的功能,适合作为敏感元件应用于仿生嗅觉受体传感器的构建.

英文摘要:

ODR-10, an olfactory receptor protein of C. elegans, was used as a model of olfactory receptors expressed in human embryonic kidney (HEK)-293 cells as a fusing protein with 6xhis-tag and rho-tag. The expression of the target protein was analyzed by RT-PCR (reverse transcription-polymerase chain reaction), Western blot and immunocytochemistry methods. The specific binding to odorant molecules of the olfactory receptor was measured using intracellular Ca2+ assays. Then the olfactory receptor ODR-10 was immobilized onto the surface of quartz crystal microbalance (QCM) sensor to fabricate the olfactory receptor-based gas biosensor. The results demonstrated that this biosensor can detect the natural ligand of ODR-10 (diacetyl) with high sensitivity and specificity. All these results indicated that the olfactory receptor ODR-10 has been expressed successfully in the heterologous cell system and it can be used as the sensitive material in the development of biomimetic olfactory receptor-based biosensors.

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期刊信息
  • 《科学通报》
  • 北大核心期刊(2011版)
  • 主管单位:中国科学院
  • 主办单位:中国科学院
  • 主编:周光召
  • 地址:北京东黄城根北街16号
  • 邮编:100717
  • 邮箱:csb@scichina.org
  • 电话:010-64036120 64012686
  • 国际标准刊号:ISSN:0023-074X
  • 国内统一刊号:ISSN:11-1784/N
  • 邮发代号:80-213
  • 获奖情况:
  • 首届国家期刊奖,中国期刊方阵“双高”期刊,第三届中国出版政府奖
  • 国内外数据库收录:
  • 美国化学文摘(网络版),美国数学评论(网络版),美国工程索引,日本日本科学技术振兴机构数据库,中国中国科技核心期刊,中国北大核心期刊(2004版),中国北大核心期刊(2008版),中国北大核心期刊(2011版),中国北大核心期刊(2014版),中国北大核心期刊(2000版)
  • 被引量:81792