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阳离子铝酞菁-黏多糖缔合物荧光探针测定生物样品中的溶菌酶
  • ISSN号:0253-3820
  • 期刊名称:《分析化学》
  • 时间:0
  • 分类:O634.32[理学—高分子化学;理学—化学]
  • 作者机构:[1]厦门大学医学院抗癌研究中心,厦门361102
  • 相关基金:本文系国家自然科学基金重大研究计划项目(No.90206016)、福建省科技重点项目(No.2012Y0081),福建省属公益类科研院所基本科研专项(No.2010R1039-3)
中文摘要:

在弱酸性介质中,具有红区发射特性的强荧光化合物阳离子铝酞菁( TTMAAlPc)在带磺酸基团的低浓度阴离子黏多糖(肝素,HP)的存在下,发生诱导聚集,导致酞菁荧光几乎完全猝灭。此聚集缔合物可作为溶菌酶的荧光底物,在溶菌酶的水解作用下,HP降解为小分子片段,破坏了TTMAAlPc的诱导聚集行为而使其释放,体系荧光显著恢复。据此现象,建立了测定溶菌酶的新方法。结合荧光光谱与荧光各向异性技术对反应机理进行了探讨。确定了最佳反应条件(醋酸缓冲体系,pH 4.0、反应温度70°C、反应时间30 min),考察了共存物质的影响。在最佳条件下,方法的线性回归方程为y=-30.12121+214.65772x, r=0.99871,线性范围为0.2~2 mg/L,检出限0.015 mg/L。本研究操作简便且有较好的选择性和灵敏度。本方法用于溶菌酶实际样品的测定,并与常规的比浊法进行了比较,结果符合良好。本研究将阳离子金属酞菁荧光探针用于酶分析,开拓了酞菁荧光探针的应用范围。

英文摘要:

We developed a novel method for the rapid determination of lysozyme using a new fluorogenic substrate that consists of a cationic aluminum phthalocyanine ( tetra ( trimethylammonio ) aluminum phthalocyanine, TTMAAlPc ) , and an anionic mucopolysaccharide ( heparin, HP ) . We found that fluorescence from the cationic aluminum phthalocyanine, a red-region fluorescence probe, was quenched significantly in acidic media in the presence of low concentrations of anionic mucopolysaccharide heparin ( HP) bearing anionic sulfonic acid groups, because of induced aggregation. The practically non-fluorescent substrate degraded into small molecular fragments upon the hydrolysis of lysozyme, and thus the phthalocyanine molecules aggregated in HP were released, resulting in significant fluorescence recovery in the reaction system. This phenomenon forms the foundation of the proposed method. The reaction mechanism was determined using fluorescence spectroscopy and fluorescence anisotropy techniques. Factors that affected the determination were investigated. Under optimal conditions, the linear range was 0. 2-2 mg/L, and the detection limit was 0. 015 mg/L. The developed method is easy to operate and has good selectivity and sensitivity. This method was used in the analysis of practical samples of lysozyme, and the results were in agreement with those determined by a conventional turbidimetric method.

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期刊信息
  • 《分析化学》
  • 北大核心期刊(2011版)
  • 主管单位:中国科学院
  • 主办单位:中国化学会 中国科学院长春应用化学研究所
  • 主编:杨秀荣
  • 地址:长春市人民大街5625号
  • 邮编:130022
  • 邮箱:fxhx@ciac.ac.cn
  • 电话:0431-85262017
  • 国际标准刊号:ISSN:0253-3820
  • 国内统一刊号:ISSN:22-1125/O6
  • 邮发代号:12-6
  • 获奖情况:
  • 1999获首届国家期刊奖,2000年获中国科学院优秀期刊特别奖,2001年入选中国期刊方阵“双高”期刊
  • 国内外数据库收录:
  • 俄罗斯文摘杂志,美国化学文摘(网络版),荷兰文摘与引文数据库,美国工程索引,美国乌利希期刊指南,美国剑桥科学文摘,美国科学引文索引(扩展库),日本日本科学技术振兴机构数据库,中国中国科技核心期刊,中国北大核心期刊(2004版),中国北大核心期刊(2008版),中国北大核心期刊(2011版),中国北大核心期刊(2014版),英国英国皇家化学学会文摘,中国北大核心期刊(2000版)
  • 被引量:52455