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不同NDV株V蛋白多克隆抗体的制备和初步应用
  • ISSN号:1008-0589
  • 期刊名称:中国预防兽医学报
  • 时间:2013.9.15
  • 页码:702-706
  • 分类:S852.65[农业科学—基础兽医学;农业科学—兽医学;农业科学—畜牧兽医]
  • 作者机构:[1]扬州大学兽医学院,江苏扬州225009, [2]中国农业科学院上海兽医研究所,上海200241
  • 相关基金:国家自然科学基金青年项目(31101822);国家高技术研究发展计划重大项目(2011AA10A209);江苏省青蓝工程(苏教师[2010]27号)
  • 相关项目:病毒P蛋白磷酸化水平对新城疫基因组转录和复制的调控机制研究
中文摘要:

新城疫病毒(NDV)的V蛋白是一种干扰素拮抗蛋白,该蛋白表达量的差异对NDV细胞嗜性的影响是目前的热点问题。为制备NDV V蛋白多克隆抗体,本研究以Class I NDV 9a5b株和Class II NDV ZJ1 P基因为模板扩增V蛋白PNT结构域和V蛋白半胱氨酸富集区(CTD)结构域,分别克隆至pET-28a(+)载体和pCold TF载体中,获得表达V蛋白或其CTD结构域的重组表达质粒。将重组质粒转化大肠杆菌诱导表达;纯化重组蛋白,并分别免疫小鼠,制备针对Class I和Class II NDV V蛋白的多克隆抗体。利用该多克隆抗体,western blot检测NDV 9a5b、La Sota、ZJ1、Herts/33株感染HeLa和DF1细胞后V蛋白的表达量变化。结果显示制备的多克隆抗体可以用于NDV V蛋白的检测,V蛋白在易感宿主禽源细胞中的表达量明显高于哺乳动物细胞。研究表明NDV V蛋白的表达水平与宿主细胞的种属差异相关。

英文摘要:

The V protein of Newcastle disease virus (NDV) acts as an interferon antagonist and the impact of expression of V protein on NDV cell tropism has become a hot topic. To study the discrepancy expression of V protein in different cells, the N-terminal of phosphoprotein (PNT) and the C-terminal of V protein (CTD) were amplified from the recombinant plasmids containing the P genes of Class I NDV 9a5b and Class II NDV ZJ1 by PCR and cloned into the pET-28a (+) and pCold TF vector to express in E.coli, respectively. The antisera against Class I and Class II NDV V proteins were prepared by immunizing BABL/c mice with the purified V proteins, respectively. The expression of V proteins in HeLa and DF1 cells infected with NDV 9a5b, La Sota, ZJ1, Herts/33 were detected by western blot using the prepared polyclonal antisera. The results showed that the expression of the V protein in avian cells were higher than that in mammal cells. These findings indicated that the expression of NDV V protein was affected by c

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期刊信息
  • 《中国预防兽医学报》
  • 北大核心期刊(2011版)
  • 主管单位:中国农业部
  • 主办单位:中国农业科学院哈尔滨兽医研究所
  • 主编:步志高
  • 地址:哈尔滨市香坊区哈平路678号
  • 邮编:150001
  • 邮箱:zgyfsyxbhvri@163.com
  • 电话:0451-51051811 51051812
  • 国际标准刊号:ISSN:1008-0589
  • 国内统一刊号:ISSN:23-1417/S
  • 邮发代号:14-70
  • 获奖情况:
  • 全国农业优秀期刊奖
  • 国内外数据库收录:
  • 美国化学文摘(网络版),英国农业与生物科学研究中心文摘,波兰哥白尼索引,英国动物学记录,中国中国科技核心期刊,中国北大核心期刊(2004版),中国北大核心期刊(2008版),中国北大核心期刊(2011版),中国北大核心期刊(2014版)
  • 被引量:12844