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基于BAC同源重组高效构建小鼠胚胎干细胞Nanog基因报告体系

ISSN号：0023-074X
期刊名称：《科学通报》
时间：0
分类：Q811.4[生物学—生物工程]
作者机构：[1]生物资源与生态环境教育部重点实验室,四川大学生命科学学院,成都610064, [2]细胞增殖分化调控系统研究教育部重点实验室,北京大学生命科学学院,北京100871, [3]北京实验动物中心,北京100871
相关基金：国家自然科学基金（批准号：30421004）资助项目.致谢感谢LiuPentao博士惠赠pL-253质粒及DY380菌株.感谢赵扬、曲秀霞、谭磊、徐君及曾博协助修改手稿.特别感谢庆婷婷、杨炜峰一直以来提供的技术支持.

作者：范彦[1], 童攒, 尤洁芳[3], 杜立颖, 邹方东[1], 丁明孝, 邓宏魁[1]

关键词：小鼠胚胎干细胞, 自我更新, Nanog, EGFP, 细菌人工染色体, 同源重组

中文摘要：

Nanog是最新发现的一个在胚胎干细胞（ES细胞）中特异表达,并在保持ES细胞多能性的机制中有重要作用的转录因子.Nanog基因的表达能非常灵敏地随ES细胞的分化而下调,使之成为指示ES细胞多能性最理想的标志基因之一.本研究基于细菌人工染色体（bacterial artificial chromosome,BAC）同源重组技术,并改进了将报告基因敲入目的位点的重组方案,高效构建了小鼠ES细胞（mES细胞）的Nanog/EGFP报告体系.基因打靶后的mES细胞具有与其源mES细胞相同的特性,并能稳定地将Nanog与EGFP（enhanced green fluorescence protein）的表达偶联.此报告体系能通过EGFP的表达有效报告Nanog基因的表达水平,从而对mES细胞分化或未分化状态作出明显指示.本研究为mES细胞自我更新和分化的研究提供了一个理想的实验体系,不仅能用于进一步优化mES细胞的培养体系,对研究Nanog的表达调控及其与其他维持mES细胞多能性的因子和途径之间的关系也有深远的意义.

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