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中华蜜蜂MRJP7基因的原核表达及多克隆抗体的制备
  • ISSN号:1671-9964
  • 期刊名称:《上海交通大学学报:农业科学版》
  • 时间:0
  • 分类:S892[农业科学—特种经济动物饲养;农业科学—畜牧兽医]
  • 作者机构:[1]浙江大学昆虫科学研究所,杭州310029
  • 相关基金:国家自然基金项目(30271008)
中文摘要:

用PCR方法从含中华蜜蜂Accmrjp7基因的质粒DNA模板中扩增出MRJP7成熟肽编码区片段,将该片段克隆入原核表达载体pGEX-4T-2,在大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)中进行融合表达,SDS—PAGE和薄层扫描显示,该基因得到高效表达,表达产物大小约为66kDa,占细胞总蛋白的22.8%。利用割胶回收的方法,获得目的蛋白,注射兔子制备多克隆抗体,并利用所获抗体进行Western blot印迹分析,检测MRJPs,获得特异性条带。

英文摘要:

The coding region of MRJP7 mature peptide was amplified by PCR from Apis cerana cerana eDNA library and cloned into the prokaryotic expression vector pGEX-4T-2 for fusion expression in E. coli. The SDS-PAGE and thin-layer scanning results showed that the expressed GST-MRJP7 fusion protein was about 66 kDa in size and about 22.8% in proportion to the total bacterial proteins. The expressed products were retrieved from the SDS-PAGE gels and used to immunize the rabbit to produce the polyclonal antibody against MRJPs. The titer of the antibody was evaluated by ELISA method and its specificity was confirmed by Western blot analysis.

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期刊信息
  • 《上海交通大学学报:农业科学版》
  • 中国科技核心期刊
  • 主管单位:国家教育部
  • 主办单位:上海交通大学
  • 主编:沈为平
  • 地址:上海七莘路2678号信箱
  • 邮编:201101
  • 邮箱:xuebao@sjtu.edu.cn
  • 电话:021-64789728
  • 国际标准刊号:ISSN:1671-9964
  • 国内统一刊号:ISSN:31-1837/S
  • 邮发代号:4-695
  • 获奖情况:
  • 农业部全国高等农业院校优秀学报一等奖,上海市教委优秀期刊奖
  • 国内外数据库收录:
  • 英国农业与生物科学研究中心文摘,中国中国科技核心期刊
  • 被引量:7620