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水泡性口炎病毒双抗体夹心ELISA检测方法的建立
  • ISSN号:1008-0589
  • 期刊名称:中国预防兽医学报
  • 时间:2012
  • 页码:637-641
  • 分类:S852.65[农业科学—基础兽医学;农业科学—兽医学;农业科学—畜牧兽医]
  • 作者机构:[1]吉林大学畜牧兽医学院,吉林长春130062, [2]吉林大学白求恩医学院,吉林长春130021
  • 相关基金:基金项目:国家自然科学基金(31072107);吉林省科技发展计划重点资助项目(20100221)
  • 相关项目:水泡性口炎病毒G蛋白受体的筛选及鉴定
中文摘要:

为建立方便快捷的水泡性口炎病毒(VSV)检测方法,本研究以抗vsv单克隆抗体(MAb)为捕获抗体,兔抗VSV多克隆抗体为检测抗体,建立VSV双抗体夹心ELISA检测方法。结果显示,该方法的最佳工作条件为:抗VSVMAb1A2的包被浓度为3.09ug/mL,兔抗VSV多克隆抗体和酶标抗体的工作浓度分别为5.16ug/mL和1:5000,以OD 450nm≥0.231作为阳性判定标准。该ELISA方法对猪水泡病病毒、猪水疱疹病毒及羊传染性脓疱病毒等均无交叉反应;敏感度可达3.125ug/mL(10^1 TCID 50);其重复性变异系数小于10%。采用建立的ELISA方法与RT-PCR方法同时检测187份临床样品,符合率达到97.9%,具有良好的相关性。本实验建立的vsv双抗体夹心ELISA检测方法具有特异性好、敏感性高、成本低及方便快捷等优点,可以用于Vsv的快速检测。

英文摘要:

To develop a method for vesicular stomatitis virus (VSV) detection, a double-antibody sandwich ELISA (DAS-ELISA) was developed using VSV monoclonal antibody (MAb) as capture antibody and rabbit polyclonal antibodies against VSV as detecting antibody. The optimized reaction conditions showed that the optimal coating concentration of VSV MAb was 3.09 g/mL, the optimal working concentration of rabbit polyclonal antibodies against VSV was 5.16 ug/mL, and the optimal working dilution of HRP-labelled goat-anti-rabbit IgG was 1:5 000 with a cutoff value of 0.231 (OD450nm). The ELISA had no cross-reaction with swine vesicular disease virus, vesicular exanthema of swine virus and off virus, and at least 3.125 ug/mL antigen (101 TCID50) of VSV was able to be detected. The coefficient of variation of reproducibility was less than 10%. A total of 187 clinical samples were detected by the ELISA and RT-PCR with agreement rate of 97.9%. The results revealed that the ELISA method was quick, sensitive and repeatable, which was applicable to the detection of VSV.

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期刊信息
  • 《中国预防兽医学报》
  • 北大核心期刊(2011版)
  • 主管单位:中国农业部
  • 主办单位:中国农业科学院哈尔滨兽医研究所
  • 主编:步志高
  • 地址:哈尔滨市香坊区哈平路678号
  • 邮编:150001
  • 邮箱:zgyfsyxbhvri@163.com
  • 电话:0451-51051811 51051812
  • 国际标准刊号:ISSN:1008-0589
  • 国内统一刊号:ISSN:23-1417/S
  • 邮发代号:14-70
  • 获奖情况:
  • 全国农业优秀期刊奖
  • 国内外数据库收录:
  • 美国化学文摘(网络版),英国农业与生物科学研究中心文摘,波兰哥白尼索引,英国动物学记录,中国中国科技核心期刊,中国北大核心期刊(2004版),中国北大核心期刊(2008版),中国北大核心期刊(2011版),中国北大核心期刊(2014版)
  • 被引量:12844