中文摘要：

目的 体外筛选设计并合成的抑制效率最佳的短发夹核糖核酸（shRNA）序列,并观察慢病毒介导的环氧合酶-2（COX-2） shRNA对类风湿性关节炎（RA）患者滑膜细胞的影响.方法 首先根据人COX-2 mRNA序列自行设计4对不同的COX-2shRNA序列,然后包装合成分别含有各对序列的慢病毒载体,并将各组慢病毒载体分别转染RA患者滑膜细胞,通过实时定量聚合酶链反应（Real-time PCR）、酶联免疫吸附试验法（ELISA）分别检测转染后细胞基因水平及蛋白质水平的变化,从而筛选最佳抑制序列.结果 以慢病毒为载体介导的COX-2 shRNA基因转染滑膜细胞后,未观察到对细胞生长速度及细胞形态有明显负面影响,转染后COX-2 mRNA表达水平显著下降,从0.83±0.09、0.84±0.06降到0.15 ±0.01、0.15 ±0.01 （P＜0.05）,相应组别的前列腺素E2（PGE2）[从（160.96±0.23） ng/L降到（84.44±1.02） ng/L]、血管内皮生长因子（VEGF）[从（93.10±0.84） ng/L降到（57.35±1.04） ng/L]、白细胞介素（IL）-1β[从（19.69 ±0.57） ng/L降到（10.60±0.53） ng/L]、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）[从（31.52 ±0.33） ng/L降到（14.55 ±0.59） ng/L]表达量显著降低（P＜0.05）.结论 慢病毒介导的RNA干扰可以显著抑制RA患者滑膜细胞COX-2的表达,从而降低炎性因子的表达量.

英文摘要：

Objective Screen the most effective hort hairpin ribonucleic acids （shRNA）sequence,and observe the effects on synovial cells of rheumatoid arthritis （RA） patients after cyclooxygenase-2 （COX-2） shRNA transfection by lentivirus.Methods Design four pairs of different COX-2 shRNA according to the human COX-2 mRNA （NM_000963.2） sequence,package and transfect four kinds of lentivirus with the COX-2 shRNA into synovial cells of RA patient,screen the best shRNA sequence by examine the level of mRNA and protein expression respectively with real-time quantitative polymerase chain reaction （Real-time PCR） and enzyme-linked immuno sorbent assay （ELISA）.Results There is no obvious negative influence on cell growth and cell morphology after COX-2 shRNA gene transfection mediated by lentivirus,COX-2 mRNA expression decreases from 0.83 ± 0.09,0.84 ± 0.06 to 0.15 ± 0.01,0.15 ± 0.01 （P 〈 0.05） and protein expression of phenyl glycidyl ether （PGE） 2 [（160.96 ± 0.23） ng/L to （84.44 ± 1.02） ng/L],vascular endothelial growth factor （VEGF） [（93.10 ±0.84） ng/L to （57.35 ± 1.04） ng/L],interleukine （IL）-1β [（19.69 ± 0.57） ng/L to （10.60 ± 0.53） ng/L],tumor necrosis factor α（TNF-α） [（31.52 ± 0.33） ng/L to （14.55 ±0.59） ng/L] decreased significantly （P 〈 0.05）.Conclusion Lentivirus mediated ribonucleic acid interference （RNAi）can significantly inhibit COX-2 mRNA expression in synovial cells of RA patients,so as to reduce the expression of inflammatory cytokines.