孔雀石绿是"三致"物质,常被非法使用于渔业生产。水产品和环境中常以孔雀石绿和隐孔雀石绿两种形式同时存在,均具有强致癌性。但由于二者结构差异较大,现有的单克隆抗体只能分别检测样品中单一药物的残留量,难以客观地反映出孔雀石绿和隐孔雀石绿的总残留量。目前同时检测两种结构的免疫分析方法鲜有报道,本文分别制备了针对孔雀石绿和隐孔雀石绿的高特异性单克隆抗体,通过研究混合抗体模式建立了可以同时检测两种物质的酶联免疫分析方法,该方法对孔雀石绿和隐孔雀石绿混合物的半抑制浓度(50%inhibiting concentration,IC50)为3.27 ng/m L,检测线LOD(IC10)为0.24 ng/m L,线性范围为0.62~17.25 ng/m L。本方法的建立对保障水产品安全具有重要意义,也为混合抗体法同时检测两种或多种残留药物提供了方法借鉴。