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青蒿紫穗槐二烯合酶基因的克隆与表达
  • ISSN号:1007-3213
  • 期刊名称:广州中医药大学学报
  • 时间:0
  • 页码:394-397
  • 语言:中文
  • 分类:Q786[生物学—分子生物学]
  • 作者机构:[1]广州军区广州总医院,广东广州510010, [2]广州中医药大学热带医学研究所,广东广州510405
  • 相关基金:国家自然科学基金高技术探索项目(编号:30271591)及面上项目(编号:30672614);国家中医药管理局科研基金(编号:02-03ZP43);广东省自然科学基金重点项目(编号:020799).
  • 相关项目:青蒿素生物合成途径的局部重建及青蒿素前体的生物转化
中文摘要:

【目的】重建青蒿素合成代谢途径,以研制青蒿素高产微生物反应器。【方法】以低温预处理青蒿试管苗提取总RNA,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增紫穗槐二烯合酶基因(ADS),并导入大肠杆菌中表达。【结果】青蒿ADScDNA测序结果已在GenBank注册。当ADScDNA与谷胱甘肽硫转移酶基因(GST)融合并在大肠杆菌表达后,其菌体裂解上清中可检测到谷胱甘肽硫转移酶(GST)活性,表明ADS基因已有可溶性表达。当裂解上清与法呢基焦磷酸(FDP)保温后,成功地检测到青蒿特有的倍半萜烯。【结论】青蒿ADS基因已在细菌体内实现功能性表达。

英文摘要:

Objective To reconstitute an anabolic pathway of artemisinin and to develop a microbial bioreactor for artemisinin.Methods Total RNA was extracted from the shoots of Artemisia annua L.cultured in vitro and pre-treated by low temperature,from which the amorpha-4,11-diene synthase gene(ADS) was amplified by RT-PCR and subsequently introduced into E.coli for overexpression.Results The sequence data of ADS cDNA was accessed in GenBank.When ADS cDNA was fused with the glutathion S-transferase gene(GST) and expressed in E.coli,the GST enzyme activity was detected in the bacterial lytic suspension,demonstrating the presence of soluble expression of ADS gene.After incubation with farnesyl diphosphate(FDP),a sesquiterpene specific to Artemisia annua L.was successfully detected in the lytic suspension.Conclusion The functional expression of ADS gene cloned from Artemisia annua L.is achieved in the bacteria.

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期刊信息
  • 《广州中医药大学学报》
  • 北大核心期刊(2011版)
  • 主管单位:广东省教育厅
  • 主办单位:广州中医药大学
  • 主编:陈蔚文
  • 地址:广州大学城外环东路232号
  • 邮编:510006
  • 邮箱:gzzyxb@gzucm.edu.cn
  • 电话:020-36585268
  • 国际标准刊号:ISSN:1007-3213
  • 国内统一刊号:ISSN:44-1425/R
  • 邮发代号:46-275
  • 获奖情况:
  • 国家期刊奖,国家“双效”期刊,荣获1999年全国优秀高校自然科学学报及教育部优秀...
  • 国内外数据库收录:
  • 美国化学文摘(网络版),美国乌利希期刊指南,美国剑桥科学文摘,中国中国科技核心期刊,中国北大核心期刊(2011版)
  • 被引量:15723