中文摘要：

目的：探讨人支气管上皮细胞γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶催化亚单位（GCLC）基因上游调控序列E-box元件的功能。方法：利用PCR法克隆人GCLC基因上游调控序列，PCR重叠延伸法对2个E-box元件分别和同时进行定点突变。扩增获得的突变体片段克隆入PMD18-T载体，DNA测序鉴定后，亚克隆入野生型GCLC-Luc荧光素酶报道载体。将3个突变体质粒和野生型质粒转染人肺泡上皮细胞A549和人支气管上皮细胞16HBE，检测转染后细胞荧光素酶活性值。结果：测序结果证实，成功将E-boxlCACGGG突变为AGCC,CG；E-box2CACGTG突变为CACGGA。GCLC-Luc、GCLC-m Eboxl-Lug（突变E-box 1）、GCLC-mEbor-2-Luc（突变E-box2）、GCLC-mEboxl2-Lug（突变E-boxl和E-box2．）转染A549细胞后荧光素酶活性值分别为（5197852±132206）U、（5455692±127431）U、（5315722±244197）U、（5174303±183179）U，转染16HBE细胞后荧光素酶活性值分别为（141157±18907）U、（126454±23724）U、（137315±22179）U、（132441±28970）U。经过统计学分析，各组荧光酶活性没有显著差别，均P〉0．05。结论：E-box元件不参与基础状态下A549细胞和16HBE细胞GCLC基因转录调控。