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焦磷酸测序技术检测k-ras基因突变方法的建立
  • ISSN号:1009-2501
  • 期刊名称:《中国临床药理学与治疗学》
  • 时间:0
  • 分类:R969[医药卫生—药理学;医药卫生—药学]
  • 作者机构:[1]长沙理工大学化学与生物工程学院,湖南长沙410004, [2]中南大学湘雅医学检验所,湖南长沙410078
  • 相关基金:国家自然科学基金(21275022,21075011);湖南省科技计划(2013FJ3075);国家科技支撑计划(2012BAC17B01)资助课题
中文摘要:

目的:建立k-ras基因突变的焦磷酸测序方法,并分析该基因在结直肠癌中的突变率。方法: 制备10份卫生部临床检验中心2013年全国k-ras基因突变检测室间质评模板DNA,对焦磷酸测序技术检测k-ras基因突变方法进行验证;制备230例结直肠癌标本gDNA,应用PyroMark Q24焦磷酸测序仪进行k-ras基因的焦磷酸测序。结果: 建立了k-ras基因突变的焦磷酸测序新方法,检测正确率100%;230例结直肠癌标本中共检出基因突变型33例,总突变率14.34% (33/230),其中12号密码子上34G〉T的突变率为1.74%(4/230),35G〉A的突变率为5.22% (12/230),35G〉T的突变率为3.04% (7/230),37G〉A的突变率为0.43% (1/230),13号密码子上38G〉A的突变率为3.91% (9/230)。结论:k-ras基因突变的焦磷酸测序新方法具有快速、准确和高通量的优点,适合于在科研和临床基因扩增检验中推广。

英文摘要:

AIM: To establish a pyrosequencing method for detecting k-ras mutation and to investi- gate the frequency and characteristic of k-ras of pa- tients with colorectal cancer. METHODS: A total of 10 DNA specimens from the ministry of health clinical test center of China for external quality as- sessment were prepared for k-ras mutation detecting method verification. A total of 230 DNA specimens from patients with colorectal cancer were used for k- ras mutation detection. RESULTS :The overall pos- itive rate of k-ras gene mutations obtained by pyrose- quencing was 14.34% (33/230), and the positive rate of mutations was 10% (23/230) at codon 12 [5.22% (12/230)for35G〉A, 3.04% (7/230) for35G〉T, 1.74% (4/230) for 34G〉T] and 4.34% (10/230) at codon 13 [0.43% (1/230) for 37G 〉 A, 3.91% (9/230) for 38G 〉 A]. CONCLUSION: This pyrosequencing method to detect k-ras mutation is proved to be a rapid, accu- rate and high throughput method alternative to con- ventional method, and it can be a preferred option in research and clinical application.

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期刊信息
  • 《中国临床药理学与治疗学》
  • 主管单位:中国科学技术协会
  • 主办单位:中国药理学会
  • 主编:孙瑞元
  • 地址:安徽芜湖市皖南医学院弋矶山医院
  • 邮编:241001
  • 邮箱:cjcpt96@163.com
  • 电话:0553-5738350 5739333
  • 国际标准刊号:ISSN:1009-2501
  • 国内统一刊号:ISSN:34-1206/R
  • 邮发代号:26-165
  • 获奖情况:
  • 国内外数据库收录:
  • 美国化学文摘(网络版),波兰哥白尼索引
  • 被引量:17630