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问号钩端螺旋体诱导J774A.1细胞凋亡及caspase-3、-6活化对凋亡的影响
  • ISSN号:1008-9292
  • 期刊名称:《浙江大学学报:医学版》
  • 时间:0
  • 分类:R377.5[医药卫生—病原生物学;医药卫生—基础医学]
  • 作者机构:[1]浙江大学医学院病原生物学系,浙江杭州310058, [2]浙江大学附属第一医院传染病诊治国家重点实验室基础医学微生物学研究室,浙江杭州310003
  • 相关基金:国家自然科学基金资助项目(30570092)
中文摘要:

目的:了解问号钩端螺旋体(钧体)诱导小鼠单核巨噬样细胞(J774A.1)凋亡的作用,以及caspase-3、-6活化对凋亡的影响。方法:建立问号钩体黄疸出血群赖型56601株J774A.1细胞感染模型。采用FITC—AnnexinV/PI荧光标记流式细胞术检测细胞凋亡或坏死情况。分别采用荧光比色法和Western Blot,检测感染细胞caspase-3、-6活性及其底物(PARA和LaminA/C)剪切情况。结果:多种不同浓度的问号钩体赖株感染均可使J774A.1细胞发生凋亡,其中以问号钩体:细胞=100:1的比例感染时凋亡率最高(48.81%±5.950o)。感染细胞caspas-3和-6最大活性分别为(1453.41±36.07)FU和(618.65±39.82)FU,是未感染细胞的16.38和9.98倍。感染细胞的PARP和LaminA/C均被剪切。Caspase-3、-6抑制剂对问号钩体赖株诱导的J774A.1细胞凋亡有明显的阻断作用。结论:问号钩体可诱导J774A.1细胞凋亡,easpase-3和-6与该细胞凋亡密切相关。

英文摘要:

Objective: To investigate the apoptosis of J774A. 1 interrogan and the effect of caspase-3,-6 activation on the apoptosis. cells induced by Leptospira Methods: Mouse monocytemacrophage like cell line J774A. 1 was infected by L. interrogans serogroup Icterohaemorrhagiae serovar icterohaemorrhagiae Lai strain 56601. The apoptosis or necrosis of infected cells was examined by flow cytometry using fluorescein labeling FITC-Annexin V/PI. The activity of caspase-3,-6,and their cleaved substrates PARP and Lamin A/C were measured by fluorometry and Western Blotting,respectively. Results. L. interrogan strain Lai was able to induce apoptosis of J774A. 1 cells and the maximal apoptotic rate was (48.81±5.95)% when microbe : cell ratio was 100 : 1. The maximal activities of caspase-3 and -6 in the infected J774A. 1 cells were (1453.41±36.07) and (618.65±39.82) FU,respectively,which were 16.38- and 9.98-fold of those uninfected.cells. PARP and Lamin A/C in the infected cells were detected. Caspase-3 and -6 inhibitors remarkably blocked the L. interrogans-induced apoptosis in J774A. 1 cells. Conclusion. L. interrogan is able to induce the apoptosis of J774A. 1 cells and intracellular caspase-3 and -6 are closely associated with the apoptosis.

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期刊信息
  • 《浙江大学学报:医学版》
  • 中国科技核心期刊
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  • 主办单位:浙江大学
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  • 国际标准刊号:ISSN:1008-9292
  • 国内统一刊号:ISSN:33-1248/R
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  • 三次全国高校优秀自然科学学报评比先后荣获二等奖...
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  • 美国化学文摘(网络版),波兰哥白尼索引,荷兰文摘与引文数据库,美国生物医学检索系统,中国中国科技核心期刊,中国北大核心期刊(2008版),中国北大核心期刊(2011版),中国北大核心期刊(2014版)
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