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针对人β-catenin基因shRNA真核表达载体的构建与鉴定
  • 期刊名称:第二军医大学学报
  • 时间:0
  • 页码:965-967
  • 语言:中文
  • 分类:R73-36[医药卫生—肿瘤;医药卫生—临床医学]
  • 作者机构:[1]首都医科大学附属北京安贞医院泌尿外科,北京100029, [2]首都医科大学附属北京安贞医院呼吸科,北京100029, [3]西安交通大学医学院第一附属医院泌尿外科,西安710061
  • 相关基金:国家自然科学基金(30872934),北京市自然科学基金(5072019).
  • 相关项目:干预β-catenin信号通路对HIF-1α诱导前列腺癌EMT效应的影响的基础研究
中文摘要:

目的:构建针对人β-catenin基因mRNA的shRNA真核表达载体,并转染HEK-293细胞,观察其对β-catenin的抑制效应。方法:化学合成用于产生针对β-catenin shRNA的对应DNA片段,将合成的寡核苷酸链退火形成双链,克隆入pSUPER真核表达载体,对重组质粒进行酶切分析和测序鉴定,筛选阳性克隆。通过脂质体介导,把重组质粒转染HEK-293细胞,RT-PCR、蛋白质印迹法检测其对β-catenin mRNA和蛋白的干涉效果,MTT比色法检测β-catenin基因表达抑制的细胞和对照组细胞的增殖。结果:RT-PCR和蛋白质印迹法检测结果显示转染组β-catenin基因的表达水平下调,MTT检测显示β-catenin表达抑制的细胞光密度值下降,细胞增殖受到了抑制(P〈0.01)。结论:成功构建了针对人β-catenin基因的shRNA载体,转染HEK-293细胞后可抑制β-catenin基因的表达。

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