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酵母双杂交筛选与转录因子ZNF580相互作用的蛋白
  • ISSN号:1000-4718
  • 期刊名称:中国病理生理杂志
  • 时间:2012.6.15
  • 页码:1120-1123
  • 分类:R322[医药卫生—人体解剖和组织胚胎学;医药卫生—基础医学]
  • 作者机构:[1]中国人民武装警察部队后勤学院生理学与病理生理学教研室,天津300162, [2]武警沈阳指挥学院门诊部,辽宁沈阳110034
  • 相关基金:国家自然科学基金资助项目(No.81170106);天津市自然科学基金资助项目(No.10JCYBJC26500);武警后勤学院资助项目(No.WYM2010-5)
  • 相关项目:转录因子ZNF580 在缺血-再灌注脑损伤中的作用及分子机制
中文摘要:

目的: 寻找可能与锌指转录因子ZNF580存在相互作用的蛋白。方法: 以ZNF580基因开放阅读框作为模版,PCR扩增后连接入酵母表达质粒pGB。诱饵质粒pGB-ZNF580经测序验证后转化酵母菌株Y190,人胎脑cDNA文库亦转化到能稳定表达诱饵蛋白的Y190酵母菌株中,并铺到含有营养缺陷型培养基(SD/-Trp/-His/-Leu)的培养皿上进行初步筛选。所得阳性克隆再进行β-半乳糖苷酶克隆转移滤纸实验进一步去除假阳性。随机挑取部分阳性克隆,逐一转化入含有诱饵质粒的Y190 酵母菌进行一对一验证。分离阳性克隆质粒测序,并应用生物信息学方法分析阳性克隆cDNA编码的蛋白。结果: 确定了14种与ZNF580可能存在相互作用的蛋白。结论: 初步探讨了ZNF580的功能及其可能参与的信号转导通路,为进一步研究转录因子ZNF580参与动脉粥样硬化的机制奠定了实验基础。

英文摘要:

AIM: To identify the possible proteins interacting with zinc finger transcription factor ZNF580. METHODS: The open reading frame of ZNF580 gene was amplified by PCR and ligated into plasmid pGB. The bait plasmid pGB-ZNF580 was transformed into Y190 yeast strain after sequencing. Human fetal brain cDNA library was also transformed into the bait yeast Y190 that could express the bait protein. The co-transformants were plated onto SD/-Trp/-Leu/-His selective medium. Recognition of positive colonies was performed by β-galactosidase colony-lift filter assay. Some positive plasmids were transformed into the bait yeast separately further to eliminate the false positive ones. The inserted cDNAs were extracted and analyzed for homology using the BLAST program against the GenBank/EMBL/DDBJ non-redundant sequence database. RESULTS: Fourteen proteins were identified to possibly interact with ZNF580. CONCLUSION: The possible signal pathway in which ZNF580 may be involved was initially explored.

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期刊信息
  • 《中国病理生理杂志》
  • 中国科技核心期刊
  • 主管单位:中国科学技术协会
  • 主办单位:中国病理生理学会
  • 主编:陆大祥
  • 地址:广东省广州市黄埔大道西601号
  • 邮编:510632
  • 邮箱:obsbjbb@jnu.edu.cn
  • 电话:020-85220269
  • 国际标准刊号:ISSN:1000-4718
  • 国内统一刊号:ISSN:44-1187/R
  • 邮发代号:46-98
  • 获奖情况:
  • 1997-2000年连续获得中国科协优秀基础性和高科技...,1992、1996、2000、2004、2008年,连续五次入选中...,2008-2010年,连续三年荣获“百种中国杰出学术期...,2010年获广东省期刊最高奖——品牌期刊奖
  • 国内外数据库收录:
  • 美国化学文摘(网络版),日本日本科学技术振兴机构数据库,中国中国科技核心期刊,中国北大核心期刊(2004版),中国北大核心期刊(2008版),中国北大核心期刊(2011版),中国北大核心期刊(2014版),中国北大核心期刊(2000版)
  • 被引量:37010