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烟台黑猪SLA-2-YTH原核表达载体的构建及表达
  • ISSN号:1671-7236
  • 期刊名称:中国畜牧兽医
  • 时间:2014
  • 页码:85-89
  • 分类:Q78[生物学—分子生物学]
  • 作者机构:[1]大连大学生命科学与技术学院,辽宁大连116622, [2]吉林农业大学生命科学学院,吉林长春130118, [3]河北省涿鹿县医院,河北涿鹿075600
  • 相关基金:基金项目:国家自然科学基金项目(31172304);地方高校国家级大学生创新创业训练计划(201211258006).
  • 相关项目:猪源病毒CTL多肽表位与SLA-I结晶研究
中文摘要:

为构建烟台黑猪SLA-2-YTH基因原核表达载体,本研究设计引物PCR扩增SLA-2-YTH胞外区,将其克隆至pMD 19-T Simple载体,筛选阳性克隆。阳性克隆经酶切后,进一步与表达载体pET-28a(+)连接,转化BL21(Rosseta)感受态细胞并进行诱导表达,SDS-PAGE检测蛋白表达情况。结果显示,SLA-2-YTH胞外区亚克隆大小为834bp,酶切鉴定证实其成功插入pET-28a(+)表达载体。SDS-PAGE结果显示,SLA-2-YTH基因导入宿主菌后成功表达,蛋白大小约31.0ku,与预期结果相符,优化后蛋白相对表达量达25%以上。本研究成功构建了烟台黑猪SLA-2-YTH原核表达载体,获得了表达蛋白,为今后进一步的结构和功能研究奠定基础。

英文摘要:

In order to construct the SLA-2-YTH gene prokaryotic expression vector of Yantai Black pig, a pair of primers for amplifying the extracellular domain of SLA-2-YTH by PCR was designed, followed by cloning the gene into pMD 19-T Simple vector, and then the positive clones could be analyzed directly. After cleavage with Nde I and Xho I, the positive clone was successfully inserted into pET 28a( + ) and then the recombinant plasmids were transformed into competent cell BL21 (Rosseta). After induction, the protein expression could be detected by SDS-PAGE. The results showed that sub-clone of the extracellular domain of SLA-2-YTH was about 834 bp, and it was successfully cloned into pMD 19 T Simple vector showed by the enzyme analysis. By SDS-PAGE, SLA-2-YTH gene was successfully expressed in Escherichia coli BL21 (Rosseta) and the target protein was about 31.0 ku, which was consistent with prediction. After optimization, the relative expressed content of recombinant SLA-2 protein reached more than 25 %. Through the research, we successfully constructed the SLA-2-YTH gene prokaryotie expression vector of Yantai Black pig, and then gained the expressed protein, which would lay the foundation for the future study of structure and function of SLA-2.

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期刊信息
  • 《中国畜牧兽医》
  • 中国科技核心期刊
  • 主管单位:中华人民共和国农业部
  • 主办单位:中国农业科学院北京畜牧兽医研究所
  • 主编:李琍
  • 地址:中国农业科学院北京畜牧兽医研究所
  • 邮编:100193
  • 邮箱:zgxmsy@caas.cn
  • 电话:010-62816020 62811226 62810371
  • 国际标准刊号:ISSN:1671-7236
  • 国内统一刊号:ISSN:11-4843/S
  • 邮发代号:2-215
  • 获奖情况:
  • 1996年被农业部评为“95中国出版成就展”参展期刊...,1998年在首届全国畜牧兽医优秀科技期刊评比中总分...,2002年被中国期刊协会农业期刊分会和中国农学会评...
  • 国内外数据库收录:
  • 美国化学文摘(网络版),中国中国科技核心期刊,中国北大核心期刊(2008版),中国北大核心期刊(2011版),中国北大核心期刊(2014版)
  • 被引量:22619