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NGAL蛋白Ni^2＋-金属鏊合层析纯化及其鉴定

ISSN号：1004-616X
期刊名称：《癌变．畸变．突变》
时间：0
分类：R730[医药卫生—肿瘤;医药卫生—临床医学] Q503[生物学—生物化学]
作者机构：[1]汕头大学医学院肿瘤病理研究室，广东汕头515031, [2]汕头大学医学院生物化学与分子生物学教研室，广东汕头515031
相关基金：国家自然科学基金(No.399900069和No.30170428) ;广东省自然科学基金(No.010431) ;广东省高校自然科学研究基金(No.200033);广东省医学科研基金(No.A2001419);汕头大学研究与发展基金(No.L0004)

作者：王朝阳[1], 许丽艳[1], 荣举[2], 李劲涛[1], 李恩民[2]

关键词： NGAL, Ni^2+-金属鏊合层析, 6×His, MALDI-TOF-MS

中文摘要：

背景与目的：通过对新癌基因NGAL的原核融合表达产物进行Ni^2+-金属鏊合层析纯化及其MALDI-TOF-MS鉴定，最后获得一定丰度与纯度的NGAL蛋白；材料与方法：将pDsbA2．0-NGAL融合表达载体转化大肠杆菌，进行IPTG诱导表达，SDS-PAGE分析表达产物的产量与可溶性，然后将表达产物进行Ni^2+-金属鏊合层析纯化及其MALDI-TOF-MS鉴定。结果：将pDs-bA2．0-NGAL融合表达载体进行IPTG诱导表达，SDS-PAGE分析显示表达的NGAL融合蛋白产量高、可溶性好；对表达的NGAL蛋白进行Ni^2+-金属鏊合层析纯化后其纯度>95％，MALDI-TOF-MS鉴定结果提示纯化后NGAL蛋白分子量与其理论分子量的误差仅为0．9l％。。结论：通过对新癌基因NGAL的原核融合表达产物进行Ni^2+-金属鏊合层析纯化及其MALDI-TOF-MS鉴定，最后确切获得了一定丰度电泳纯的NGAL蛋白，这为下一步制备其抗体奠定了良好的实验材料。

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