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伪狂犬病病毒Ea株UL14基因的克隆、序列分析及表达
  • ISSN号:1005-4545
  • 期刊名称:《中国兽医学报》
  • 时间:0
  • 分类:S852.65[农业科学—基础兽医学;农业科学—兽医学;农业科学—畜牧兽医] R535[医药卫生—临床医学;医药卫生—内科学]
  • 作者机构:[1]华中农业大学动物医学院,湖北武汉430070
  • 相关基金:国家自然科学基金资助项目(30400322);霍英东青年教师基金资助项目(91029).
中文摘要:

从伪狂犬病病毒Ea株基因组DNA中克隆含UL14基因的BamHⅠ第3片段并进行序列分析。根据测定的序列设计1对能扩增UL14基因完整编码区的引物,PCR扩增UL14基因并将其插入原核表达载体pGEX-KG,获得原核表达质粒pKG-UL14,转化BL21(DE3),在IPTG诱导下,GST-UL14融合蛋白获得高效表达,表达产物的相对分子质量为44 000,并以包涵体形式存在。纯化的表达产物免疫兔,获得了针对UL14蛋白的高效价多抗血清。进一步将UL14基因克隆到真核表达载体pEGFP-C1中EGFP基因的3′端,获得与EGFP融合表达的真核表达质粒pEGFP-UL14,转染Hela细胞,通过荧光显微镜观察发现,转染后24、48 h的融合蛋白EGFP-UL14主要定位在胞浆,但转染后72 h的融合蛋白主要定位在细胞核。上述研究结果为进一步阐明UL14的结构与功能奠定了基础。

英文摘要:

BamHⅠ-3 fragment containing UL14 gene was cloned from pseudorabies virus genome DNA and sequenced.According to result of sequencing,UL14 gene was amplified and inserted into prokaryotic expressing vector pGEX-KG.After transformed into E.coli BL21(DE3),the fusion protein GST-UL14 was expressed under induction with IPTG.The results of SDS-PAGE analysis showed that GST-UL14 was 44 000 in size and presented as inclusion body.Anti-UL14 polyclonal antisera were produced in rabbits with the purified fusion protein GST-UL14.Eukanyotic expressing plasmid pEGFP-UL14 expressing EGFP-UL14 fusion protein was constructed,transfected into Hela cells,and detected at 24,48,72 h post transfection.Fluorescence assay of Hela cells transfected with pEGFP-UL14 indicated that most of UL14 consist in cytoplasm at 24,48 h post transfection and translocated to nucleolus 72 h post transfection.The above results lay foundation for further studying the structure and functions of UL14 gene.

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期刊信息
  • 《中国兽医学报》
  • 北大核心期刊(2011版)
  • 主管单位:中华人民共和国教育部
  • 主办单位:吉林大学
  • 主编:王哲
  • 地址:吉林省长春市西安大路5333号
  • 邮编:130062
  • 邮箱:xbcjvs@163.com
  • 电话:0431-87836531 87836534
  • 国际标准刊号:ISSN:1005-4545
  • 国内统一刊号:ISSN:22-1234/R
  • 邮发代号:12-105
  • 获奖情况:
  • 第二届全国优秀科技期刊评比二等奖,连续多次被评为全军优秀医学期刊一等奖,全国高校优秀自然科学学报评比一等奖,中国期刊方阵“双百”期刊
  • 国内外数据库收录:
  • 美国化学文摘(网络版),英国农业与生物科学研究中心文摘,日本日本科学技术振兴机构数据库,中国中国科技核心期刊,中国北大核心期刊(2004版),中国北大核心期刊(2008版),中国北大核心期刊(2011版),中国北大核心期刊(2014版),中国北大核心期刊(2000版)
  • 被引量:18973