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抗克百威单克隆抗体的研制
  • ISSN号:1672-2043
  • 期刊名称:《农业环境科学学报》
  • 时间:0
  • 分类:X592[环境科学与工程—环境工程]
  • 作者机构:[1]浙江大学农药与环境毒理研究所,浙江杭州310029, [2]浙江大学生物技术研究所,浙江杭州310029
  • 相关基金:国家自然科学基金(30370944)
中文摘要:

用与牛血清蛋白(BSA)交联的克百威人工抗原(BFNB—BSA)免疫的BALB/C鼠脾细胞与SP2/0鼠骨髓瘤细胞融合,经筛选、克隆,得到1株能稳定分泌克百威抗体的单克隆细胞株(1E8)。鉴定结果表明,1E8的抗体类型及亚类均为IgG1,其轻链为K链。制备单克隆抗体腹水,腹水的间接ELISA(酶联免疫吸附分析)效价在1×10^-6以上。直接ELISA线性回归方程为y=15.701g(x)-5.8795,F=0.9904,抑制中浓度IC50=35.1μg·L^-1,最低检测限IC20=5.2μg·L^-1该单克隆抗体与克百威特异性结合反应的50%抑制质量浓度为35.1μg·L^-1。除丁硫克百威以外与其他克百威结构类似物无交叉反应。

英文摘要:

High affinity monoclonal antibodies (MAb) against carbofuran was produced by using 500 mg·mL^-1 PEG4000 to do cells fusion, and using HAT (H, hypoxanthine; A, aminopterin; T, thymidine) culture medium for screening and limiting dilution for cell sub-cloning. Hybridoma lines were screened for specificity to carbofuran by an Enzyme-linked Immunosorbent Assay (ELISA). One hybridoma cell line (1E8) secreting monoclonal antibody (MAb) against carbofuran was produced by fusing mouse myeloma cells (SP2/0) with spleen cells from BALB/C which immunized by the artificial antigen conjugated with bovine serum albumin (BSA). The antibodies of hybridoma culture supernatant had no reaction with BSA and Ovalbumin (OVA). Isotype and subclass of the monoclonal cell line (1E8) showed that it belonged to IgGl. The light chain of the MAb was identified to be K. The MAb obtained could specifically react with carbofuran with almost no cross-reactivity to carbofuran analogues except carbosulfan, with the titres of ascitic fluids up to 1 ×10^-6 by indirect ELISA. Ascites antibodies generated by hybridoma of 1E8 cells were purified. Inhibition rate studies showed that the detection limit of the ELISA was 5.2 μg· L^-1, with the regression equation of direct ELISA y=15.701g (x)-5.879 5, r^2=0.990 4, IC50 value being 35.1 μg·L^-1. The MAb can be used to prepare the reagents for analyzing carbofuran residue.

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期刊信息
  • 《农业环境科学学报》
  • 北大核心期刊(2011版)
  • 主管单位:中华人民共和国农业部
  • 主办单位:农业部环境保护科研监测所 中国农业生态环境保护协会
  • 主编:李文华
  • 地址:天津市南开区复康路31号
  • 邮编:300191
  • 邮箱:caep@vip.163.com
  • 电话:022-23674336 23006209
  • 国际标准刊号:ISSN:1672-2043
  • 国内统一刊号:ISSN:12-1347/S
  • 邮发代号:6-64
  • 获奖情况:
  • 全国中文核心期刊,列于被引频比最高的中国科技期刊500名之内
  • 国内外数据库收录:
  • 俄罗斯文摘杂志,美国化学文摘(网络版),英国农业与生物科学研究中心文摘,美国剑桥科学文摘,中国中国科技核心期刊,中国北大核心期刊(2008版),中国北大核心期刊(2011版),中国北大核心期刊(2014版)
  • 被引量:34877