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红曲菌Fosmid文库的构建与分析
  • 期刊名称:北京师范大学学报(自然科学版),已录用
  • 时间:0
  • 分类:Q503[生物学—生物化学] TS264.4[轻工技术与工程—发酵工程;轻工技术与工程—食品科学与工程]
  • 作者机构:[1]南昌大学中德联合研究院,南昌大学食品科学教育部重点实验室,南昌330047
  • 相关基金:国家自然科学基金资助项目(30460006);江西省自然科学基金资助项目(0530081)
  • 相关项目:红曲霉的桔青霉素合成候选基因的克隆及部分基因的功能分析
中文摘要:

采用低熔点琼脂糖包埋红曲菌细胞核制成胶块,然后利用蛋白酶K消化被包埋的细胞核,纯化胶块里的大片段DNA,随机剪切法回收40kb左右的DNA,与Fosmid载体连接,经包装、转染构建红曲菌的基因组Fosmid文库,库容量为3×10^4,平均插入片段长度为36.6kb.将其中7700个单克隆保存于21块384孔微孔板中,-80℃储存.该文库符合黏粒文库的品质要求,为克隆聚酮化合物基因簇或其他重要基因及其功能的研究奠定了基础.

英文摘要:

Megabase-sized DNA fragments were prepared by embedding Monascus nuclei in low melting- point agarose, lysis in SDS, and proteinase-K digestion. DNA fragments were then randomly cut and polished with a blunt-end repair kit. Fragments from 30-45 kb were ligated into the pCCIFOS vector, packaged into phage particles with lambda packaging extracts, and transfected into EPI300 E. coli cells, resulting in a genomic library with 3 × 10^4 clones. Restriction enzyme analysis revealed that the average insert is 36.6 kb in length. The resultant 7 700 colonies were stored in 384-well microtiter plates at --80℃. This library is a typical Fosmid library, and will be useful for cloning polyketide synthesis gene cluster.

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