位置:成果数据库 > 期刊 > 期刊详情页
改进Tripure法提取鉴定小鼠组织总RNA
  • ISSN号:2095-4344
  • 期刊名称:《中国组织工程研究》
  • 时间:0
  • 分类:R361.2[医药卫生—病理学;医药卫生—基础医学]
  • 作者机构:[1]武装警察部队青海省总队医院外二科,青海海西宁市 810000, [2]解放军第三军医大学大坪医院野战外科研究所六室,重庆市 400042
  • 相关基金:国家自然科学基金资助项目(30271343,30470770)
中文摘要:

目的改进从新鲜动物组织提取,鉴定纯度及完整性较高总RNA的技术方法。方法实验于2005-05-16/08-25在解放军第三军医大学大坪医院创伤分子生物学实验室进行。用健康4-6周龄昆明种小鼠70只,颈椎脱臼法处死,取肺组织约100mg。在Tripure Isolation试剂说明书基础上,对提取组织RNA的操作步骤进行调整改进,包括:(1)迅速组织取材,可不将组织切割成碎块而直接中速匀浆。(2)匀浆头夹层每次使用前后一定要彻底清洗干净,新鲜组织使用5mL离心管匀浆。(3)吸取含RNA的三相分层上清液时,吸取2500μL即可。(4)RNA沉淀后,用无水乙醇再洗1次。并对常规琼脂糖凝胶电泳做适当改进用于鉴定RNA的质量,改进的电泳方法:(1)电泳RNA所用器械均用肥皂水,体积分数为0.03的H2O2清洗2遍,1g/L焦碳酸二乙酯处理的灭菌双蒸水冲洗,室温晾干备用。(2)用新配的0.5×TBE配制10g/L琼脂糖凝胶,倒胶时Goldview核酸染料直接加入凝胶中。(3)琼脂糖凝胶板放入电泳槽后再加入经灭菌的0.5×TBE。电泳电压5V/cm,电泳时间1.5h后凝胶成像系统拍照记录。结果(1)取提取的总RNA5μg进行电泳1.5h后,可见28S,18S,5S 3条清晰的RNA条带,其中28S条带的亮度约为18S条带的2倍,5S条带隐约可见。(2)用该法提取的新鲜组织RNA。经电泳鉴定及反转录-聚合酶链反应检测,显示RNA的纯度及模板性较好。全部操作过程可在2.5h内完成。结论用改进方法提取的新鲜组织RNA质量稳定,电泳鉴定快速可靠。

同期刊论文项目
同项目期刊论文
期刊信息
  • 《中国组织工程研究》
  • 北大核心期刊(2014版)
  • 主管单位:中华人民共和国卫生和计划生育委员会
  • 主办单位:中国康复医学会 《中国组织工程研究》杂志社
  • 主编:唐佩福
  • 地址:沈阳浑南新区10002邮政信箱
  • 邮编:110180
  • 邮箱:crter3377@163.com
  • 电话:024-31416864
  • 国际标准刊号:ISSN:2095-4344
  • 国内统一刊号:ISSN:21-1581/R
  • 邮发代号:8-584
  • 获奖情况:
  • 2001“百种中国杰出学术期刊,卫生部首届医药卫生优秀获奖期刊,北方优秀期刊,辽宁省一级期刊,第三、四届沈阳市优秀期刊一等奖
  • 国内外数据库收录:
  • 美国化学文摘(网络版),荷兰文摘与引文数据库,荷兰医学文摘,中国中国科技核心期刊,中国北大核心期刊(2008版),中国北大核心期刊(2014版)
  • 被引量:16688