中文摘要：

目的观察微小RNA-200c（miR-200c）对膀胱癌细胞T24增殖和细胞周期的影响并探讨其机制。方法运用实时定量聚合酶链反应（Real-time PCR）技术检测膀胱癌5个细胞株中miR-200c的表达水平。借助细胞转染技术，将miR-200c模拟物（mimics）及无义对照序列转染处于对数生长期的膀胱癌T24细胞，分别构建miR-200c过表达（MU组）及阴性对照组（NC组），并通过Real-time PCR技术进行验证转染效率。用细胞计数试剂盒（CCK-8）检测两组细胞转染24、48及72 h的细胞增殖率，流式细胞术观察细胞周期分布变化，Western blot法检测细胞周期相关蛋白表达水平的变化。 结果（1）miR-200c在膀胱癌细胞株EJ（13.204±0.946）、T24（18.259±0.776）、253J（8.333±0.543）、5637（6.594±0.326）、RT4（11.348±0.513）中表达量均显著高于正常尿路上皮细胞SV-Huc （1.053±0.078），差异有统计学意义（P＝0.000）。（2）MU组在转染miR-200c mimics 48、72 h后吸光度值（1.485±0.131、2.396±0.110）均显著高于NC组（1.158±0.182、1.893±0.216），差异有统计学意义（P＝0.050、0.023）。（3）与NC组比较，MU组细胞周期分布G1期比例下降[（54.65±0.60）%比（64.51±0.63）%，P＝0.004]，S期比例上升[（31.43±0.77）%比（27.99±0.53）%，P＝0.034]，G1/S比值下降（1.74±0.06比2.31±0.07，P＝0.013）。（4）转染miR-200c后细胞周期蛋白依赖激酶（CDK）2（1.44±0.10比0.86±0.15，P＝0.005）、CDK4（3.05±0.17比1.24±0.07，P＝0.001）、E2F3（1.81±0.22比1.18±0.20，P＝0.021）表达水平均升高。 结论 miR-200c通过调控细胞周期相关蛋白促使膀胱癌T24细胞周期由G1向S期转变，从而促进膀胱癌细胞增殖。

英文摘要：

ObjectiveTo investigate the influence of microRNA （miRNA, miR）-200c on cell proliferation and cell cycle in bladder cancer T24 cells and the preliminary mechanism. MethodsThe expression of miR-200c in bladder cancer cell lines was detected using real-time quantitative polymerase chain reaction （Real-time PCR）. T24 cells were transfected with miR-200c mimics （MU group） or nonsense control （NC group） individually to generate negative control group and over-expression group. Then cell proliferation was assessed using cell counting kit-8 （CCK-8） kits at 24, 48 and 72 h while cell cycle distribution was detected by flow cytometry. Finally, Western blotting was applied to detect the levels of cell cycle-related proteins. ResultsMiR-200c was up-regulated in bladder cancer cell lines EJ （13.204±0.946）, T24 （18.259±0.776）, 253J （8.333±0.543）, 5637 （6.594±0.326）, RT4 （11.348±0.513） as compared with normal urothelial cell line SV-Huc （1.053±0.078, P=0.000）. MiR-200c mimics promoted cell proliferation at 48 and 72 h after transfection [（1.485±0.131 and 2.396±0.110） vs. （1.158±0.182 and 1.893±0.216）, P=0.050, P=0.023] and induced G1/S checkpoint release （P=0.013）. Meanwhile, the protein levels of cyclin-dependent kinase （CDK）2 （1.44±0.10 vs. 0.86±0.15, P=0.005）, CDK4 （3.05±0.17 vs. 1.24±0.07, P=0.001）, E2F3 （1.81±0.22 vs. 1.18±0.20, P=0.021） were upregulated after transfection. ConclusionMiR-200c promotes cell proliferation and induces G1/S transition in bladder cancer T24 cell lines via regulating cell cycle-related proteins.