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BTG2基因干扰重组慢病毒的制备及在A549细胞中的表达鉴定
  • ISSN号:1004-0501
  • 期刊名称:《四川医学》
  • 时间:0
  • 分类:Q78[生物学—分子生物学]
  • 作者机构:[1]第三军医大学大坪医院野战外科研究所肿瘤中心,创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室,重庆400042, [2]广州军区武汉总医院肿瘤科,湖北武汉430070
  • 相关基金:国家自然科学基金面上项目(编号:81272498;81301631),重庆市博士后科研项目特别资助(编号:Xm201350)
中文摘要:

目的:用已构建好的 BTG2-siRNA重组的慢病毒表达载体包装成具有感染性的慢病毒颗粒,获得稳定BTG2-siRNA表达的 A549细胞。方法构建的 BTG2-siRNA 慢病毒表达载体,经测序后证实与标准序列一致。将BTG2-siRNA慢病毒表达载体与其他两种慢病毒包装载体质粒共转染293T细胞,获得BTG2基因siRNA重组慢病毒。感染A549细胞后,用25μg/mL的嘌呤霉素筛选稳定干扰BTG2表达的A549细胞。 CCK8法检测感染BTG2干扰慢病毒的A549细胞的增殖能力变化。结果 Western blot检测提示感染BTG2-siRNA慢病毒的A549细胞总蛋白中BTG2表达要明显低于正常的A549细胞。 CCK8实验显示,感染BTG2干扰慢病毒的A549细胞的增殖能力增加。结论成功制备了BTG2基因siRNA重组慢病毒颗粒,感染A549细胞后可检测到BTG2蛋白的表达明显降低。为进一步研究BTG2基因在恶性肿瘤中的生物学功能与相关机制的研究奠定了基础。

英文摘要:

Objective BTG2-siRNA reconstructed lentiviral expression vector was used to pack infectious lentiviral parti-cles in order to obtain BTG2-siRNAstably expressing A549 cells. Methods BTG2-siRNAlentiviral expression vector was recon-structed in the sigma company and the expressed sequence was verified by direct sequencing to be consistent with standard se-quence. 293 cells were co-transfected with BTG2-siRNAlentiviral expression vector and two other lentiviral expression vectors yielding BTG2 siRNA reconstructed lentiviral. After infected, A549 cells that stably interrupt expression of BTG2 was identified through 25 ug/ml puromycin. CCK8 was utilized to evaluate proliferation after knocking down BTG2. Results Expression level of BTG2 was significantly decreased in A549 cells transfected with BTG2-siRNAlentiviral expression vector compared with normal cells by western blot evaluation of total protein preparation. Proliferation of A549 cells was increased after transfected with BTG2 shRNA by CCK8. Conclusion BTG2-siRNAlentiviral expression vector was successfully constructed and BGT2 protein in A549 was significantly decreased after infected. This research made foundation for further investigation of biologic function of BTG2 in malignancy.

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期刊信息
  • 《四川医学》
  • 中国科技核心期刊
  • 主管单位:四川省卫生厅
  • 主办单位:四川省医学会
  • 主编:沈骥
  • 地址:成都市武侯区玉林南街2号附3号
  • 邮编:610041
  • 邮箱:
  • 电话:028-86136765
  • 国际标准刊号:ISSN:1004-0501
  • 国内统一刊号:ISSN:51-1144/R
  • 邮发代号:62-103
  • 获奖情况:
  • 四川省优秀期刊,加入核心期刊
  • 国内外数据库收录:
  • 美国化学文摘(网络版),中国中国科技核心期刊
  • 被引量:35644