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萝卜基因组DNA RAPD与ISSR—PCR反应体系优化
  • ISSN号:1001-4705
  • 期刊名称:《种子》
  • 时间:0
  • 分类:S631.1[农业科学—蔬菜学;农业科学—园艺学]
  • 作者机构:[1]南京农业大学作物遗传与种质创新国家重点实验室/园艺学院,南京210095
  • 相关基金:国家自然科学基金(30030238,30571193);江苏省自然科学基金(创新人才BK2004418);江苏省高技术研究计划(BC 21005314)项目资助部分内容;上海市科技兴农重点攻关(沪农科攻字2004第9-1号)项目.
中文摘要:

对影响PCR反应的主要因子——模板DNA、引物、dNTPs和Mg^2+浓度进行优化,建立起适合于萝卜基因组DNA的RAID和IssR反应体系。RAPD反应体系(18μl)为随机引物0.4~0.6μmol/L,dNTPs0.15~0.2mmol/L,Mg^2+ 2.0mmol/L,模板DNA10~40ng,TaqDNA聚合酶0.8U;ISSR反应体系(16-)为引物0.5μmol/L,dNTPs 0.16mmol/L,Mg^2+ 2.5mmol/L,模板DNA10~40ng,TaqDNA聚合酶0.64U。对扩增程序中复性温度进行了梯度PCR试验,表明35~42℃(37℃)与52.4-58.3℃(55℃)分别适于萝卜基因组DNA的RAID.PCR和ISSR-PCR反应:应用优化的RAPD和ISSR反应体系对17个萝卜品种进行了鉴定分析。研究结果将为萝卜分子育种、品种鉴定与种子纯度检测提供重要的技术基础。

英文摘要:

The effect of different concentrations of template DNA, primer, dNTPs and Mg^2+ on the PCR reaction was analyzed and the optimized RAPD and ISSR-PCR systems in radish were established. The RAPD-PCR reaction was performed in a 18 L solution containing 0.4 - 0.6 umol/L of RAPD primer,0. 15 - 0.2 mmol/L of dNTPs,2.0 mmol/L of Mg^2+ ,genomic DNA 10 -40 ng and 0.8 U TaqDNA polymerase. The ISSR-PCR reaction was perfolmed in a 16 ul solution containing 0.5 umol/L of primer,0.16 mmol/L of dNTPs,2.5 mmol/L of Mg^2+ ,10-40 ng template DNA and 0.64 U TaqDNA polymerase. Gradient PCR experiment showed,The annealing temperature of 35 -42℃ (37℃)and 52.4 -58.3℃ (55 ℃ ) are suitable for BAPD and ISSRPCR in radish,respectively 17 radish caltivars were fingerprinted with the optimized systems.The systems would play an important role in molecular breeding,cultivar fingerprinting and seed purity testing in radish.

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期刊信息
  • 《种子》
  • 中国科技核心期刊
  • 主管单位:贵州省种子管理站
  • 主办单位:贵州省种子管理站 贵州省种子学会 中国种子协会
  • 主编:张太平
  • 地址:贵阳市观山湖区黔灵山路146号观山小区25栋11楼3号
  • 邮编:550081
  • 邮箱:zhzi@chinajournal.net.cn
  • 电话:0851-85289332
  • 国际标准刊号:ISSN:1001-4705
  • 国内统一刊号:ISSN:52-1066/S
  • 邮发代号:66-22
  • 获奖情况:
  • 第二届国家期刊奖百种重点期刊,全国中文核心期刊,中国科技核心期刊,中国期刊方阵双效期刊,全国优秀科技期刊,第一届贵族省优秀期刊奖期刊.
  • 国内外数据库收录:
  • 英国农业与生物科学研究中心文摘,日本日本科学技术振兴机构数据库,中国中国科技核心期刊,中国北大核心期刊(2004版),中国北大核心期刊(2008版),中国北大核心期刊(2011版),中国北大核心期刊(2014版),中国北大核心期刊(2000版)
  • 被引量:21188