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青稞脱水素基因dhn4的克隆与原核表达
  • ISSN号:0490-6756
  • 期刊名称:《四川大学学报:自然科学版》
  • 时间:0
  • 分类:Q78[生物学—分子生物学]
  • 作者机构:[1]四川大学生命科学学院生物资源与生态环境教育部重点实验室,成都610064, [2]四川教育学院,成都610041
  • 相关基金:国家自然科学基金(30670166,30571119);四川省科技厅项目(2006J13-088,04ZQ026-036);教育部重点项目及新世纪优秀人才支持计划(108110,NCET-0786);四川大学科技创新基金(2005CF12) 致谢感谢Close教授(University of California-Riverside)为我们提供了脱水素多克隆抗体,梁厚果教授为实验提供宝贵的意见,在此一并致谢.
中文摘要:

用RT—PCR的方法从重要的高原作物青稞(Hordeum vulgare L.var.nudum Hook.f.)中克隆到了脱水素基因dhn4,其编码区长为678bp,所编码的蛋白质DHN4为YSK7型脱水素、经预测,该蛋白二级结构易形成α-螺旋,并无固定的三级结构.将dhn4基因cDNA编码区定向克隆到载体PET30-c上,获得了重组质粒PET—dhn4,该重组质粒再转化到大肠杆菌BL21菌株,37℃经1.5mmol/LIPTG诱导获得了大量分子量约为35kD的融合蛋白,然后用亲和层析的方法对该蛋白进行纯化,得到了纯化的脱水素DHN4蛋白.

英文摘要:

A dehydrin gene (dhn4) cDNA fragment has been obtained via RT-PCR from Tibetan hulless barley(Hordeum vulgate L. var. nudum Hook. f. ). It indicated that dhn4 encoded a YSK2 type dehydrin (DHN4). The secondary structure of DHN4 predicated with software Anthepro 5.0 is prone to α-helix, and the tertiary structure predicated by SWISS-PROT indicated intrinsically unstructured. The coding region of the dhn4 cDNA recombinated into PET30-c vector was transformed into the Eschrichia coli overexpression strain BL21, and the protein DHN4 was then produced. The fused 35 kD proteins induced with 1.5 mmol/L IPTG at 37 ℃ for 4 hours were overexpressed and then purified by Ni-NTA Purification method. The properties were visualized by SDS-PAGE and identified by Western-blotting analysis. These experiments described above made advantage of the following researches on the physiological and biochemical functions of dehydrins.

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期刊信息
  • 《四川大学学报:自然科学版》
  • 中国科技核心期刊
  • 主管单位:国家教育部
  • 主办单位:四川大学
  • 主编:刘应明
  • 地址:成都九眼桥望江路29号
  • 邮编:610064
  • 邮箱:
  • 电话:028-85410393 85412393
  • 国际标准刊号:ISSN:0490-6756
  • 国内统一刊号:ISSN:51-1595/N
  • 邮发代号:62-127
  • 获奖情况:
  • 国家“双效”期刊,四川省十佳科技期刊,教育部全国高校优秀学报二等奖(1995,1999),四川省科技优秀期刊一等奖(1996,2000)
  • 国内外数据库收录:
  • 美国化学文摘(网络版),美国数学评论(网络版),德国数学文摘,美国生物科学数据库,英国动物学记录,日本日本科学技术振兴机构数据库,中国中国科技核心期刊,中国北大核心期刊(2004版),中国北大核心期刊(2008版),中国北大核心期刊(2011版),中国北大核心期刊(2014版),中国北大核心期刊(2000版)
  • 被引量:10542