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微流控芯片毛细管电泳法检测细胞内活性氧与细胞凋亡关系
  • ISSN号:1004-4957
  • 期刊名称:分析测试学报
  • 时间:2013.8.8
  • 页码:968-972
  • 分类:O657.8[理学—分析化学;理学—化学]
  • 作者机构:[1]广东药学院中药学院,广东广州510006, [2]广东药学院基础学院,广东广州510006
  • 相关基金:国家自然科学基金项目(81001600)
  • 相关项目:单细胞分析用于中药逆转肿瘤多药耐药多指标的同时检测
作者: 孙悦|
中文摘要:

建立了微流控芯片毛细管电泳激光诱导荧光同时测定细胞内活性氧和凋亡信号的方法。先用Alexa Fluor^?488annexin V细胞凋亡试剂盒标记细胞凋亡的外翻磷脂酰丝氨酸,再用双氢罗丹明123(DHR123)标记细胞内活性氧,用PBS将细胞调整为终密度1.2×10^6cells/mL的细胞悬液。细胞群经反复冻融法破碎后,以20mmol/L硼砂(pH9.2)作电泳缓冲溶液,分离电压1.2kV,进样时间60s,1min内可完成活性氧和细胞凋亡信号的同时测定。方法简单、快速,细胞内活性氧和DHR123的反应产物(Rhl23)在0.5-μmol/L浓度范围内线性关系良好,相关系数(r)为0.998,检出限(S/N=3)为0.058μmoL/L,可用于细胞内活性氧的定量分析。测得HepG2肝癌细胞活性氧含量为0.16μmol/L,被阿霉素诱导凋亡后,细胞内活性氧含量升高至1.77μmol/L。

英文摘要:

A novel method for simultaneous determintation of intracellular reactive oxygen species and apoptosis signal was developed by microchip capillary electrophoresis with laser induced fluorescence detection. Alexa Fluor^? 488 annexin V was used to label phosphatidyl serine in outer surface of the ap optosis cells, and dihydrorhodamine 123 (DHR123) was used to convert ROS to the fluorescent rhoda mine 123 (Rh123) intracellularly. The cells were diluted with PBS to a final density of 1.2 x 10^6 cells/ mL, and then crushed by a repetitive freeze thaw method. The supernatant was separated in 1 min u sing 20 mmoL/L borate buffer(pH 9. 2) as buffer medium, with a separation voltage of 1.2 kV and an injection time of 60 s. Under the optimized experimental conditions, the calibration of Pda123 was line ar in the range of 0. 5 -3 μmol/L with a correlation coefficient (r) of O. 998. The limit of detection(S/ N = 3) was 0. 058 μmol/L. The established method was applied in the HepG2 cancer cell, and ROS in ceils was quantified as 0. 16 μmol/L before and 1.77 μmol/L after apoptosis.

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期刊信息
  • 《分析测试学报》
  • 北大核心期刊(2011版)
  • 主管单位:广东省科学技术厅
  • 主办单位:中国分析测试协会 中国广州分析测试中心
  • 主编:陈小明
  • 地址:广州市先烈中路100号34栋B201中国广州分析测试中心内
  • 邮编:510070
  • 邮箱:fxcsxb@china.com
  • 电话:020- 37656606
  • 国际标准刊号:ISSN:1004-4957
  • 国内统一刊号:ISSN:44-1318/TH
  • 邮发代号:46-104
  • 获奖情况:
  • 获广东省第一、二届优秀期刊奖
  • 国内外数据库收录:
  • 俄罗斯文摘杂志,美国化学文摘(网络版),日本日本科学技术振兴机构数据库,中国中国科技核心期刊,中国北大核心期刊(2004版),中国北大核心期刊(2008版),中国北大核心期刊(2011版),中国北大核心期刊(2014版),英国英国皇家化学学会文摘,中国北大核心期刊(2000版)
  • 被引量:25362