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人B细胞激活因子受体-TACI基因表达水平的定量测定
  • ISSN号:1000-484X
  • 期刊名称:《中国免疫学杂志》
  • 时间:0
  • 分类:R392.12[医药卫生—免疫学;医药卫生—基础医学]
  • 作者机构:[1]南通大学附属医院酶学研究室,南通226001, [2]第二军医大学长征医院实验诊断科全军临床免疫中心,上海200052, [3]南通大学附属医院检验医学中心,南通226001
  • 相关基金:本文为国家自然科学基金(30080027)、上海市基础研究重大项目(02JC14005)、上海市重大科技公关项目(04DZ19116)
中文摘要:

目的:建立实时荧光定量PCR(RFQ-PCR)检测人B细胞激活因子受体TACI mRNA含量的方法,初步探讨健康献血员外周血单个核细胞(PBMC)中TACI mRNA表达水平。方法:在TACI基因高保守区设计特异性的引物和荧光探针,PCR扩增目的片段并实时检测产物的荧光强度,根据标准品建立的标准曲线,由软件自动计算出待测样本中TACI mRNA准确含量,并以TACI mRNA和β2M mRNA含量的比值作为评价TACI表达水平的指标。结果:本法检测TACI mRNA含量的线性范围为10^9-10^1pg/ml,批内和批间重复性测定的CV分别为2.97%-9.32%和5.86%10.29%。40例健康献血员样本的PBMC中35例(87.5%)检出有TACI mRNA表达,范围为0.02-2.11。结论:成功建立RFQ-PCR检测TACI mRNA含量的方法,具有较好的检测灵敏度和重复性,为进一步探讨TACI mRNA表达水平与自身免疫性疾病发病机制之间的关系奠定了基础。

英文摘要:

Objective :To establish real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction (RFQ-PCR) for measurement of the expression level of B lymphocyte stimulator receptor-TACI mRNA in peripheral blood mononuclear cell( PBMC )in 40 healthy donora. Methods: Specific primers and TaqMan probe have been designed , and fluorescence of the PCR product was detected continuously during amplification. According to the standard curve created by plasmid DNA, the expression level of TACI in clinical samples has been determined using software, and the results were presented as the ratios of TACI mRNA to β2-microgluobulin(β2M) mRNA. Results:The detection range of the assay was from 10^9 to 10^1 pg/ml, the coeffcient of variation values for both intra-experimental and inter-experimental reproducibility ranged from 2.97% to 9.32% and 5.86% to 10.29%, respectively. In 40 PBMC samples of healthy donors, 87.5% expressed TACI mRNA, and the value ranged from 0.02 to 2.11. Conclusion:This assay had high sensitivity and reproducibility, and suitable for clinical practice, which will certainly play a significant role in approaching the mechanism of autoimmune diseases.

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期刊信息
  • 《中国免疫学杂志》
  • 中国科技核心期刊
  • 主管单位:中国科学技术协会
  • 主办单位:中国免疫学会 吉林省医学期刊社
  • 主编:田志刚
  • 地址:长春市建政路971号
  • 邮编:130061
  • 邮箱:zhmizazh@126.com
  • 电话:0431-88925027
  • 国际标准刊号:ISSN:1000-484X
  • 国内统一刊号:ISSN:22-1126/R
  • 邮发代号:12-89
  • 获奖情况:
  • 中国自然科学核心期刊,中国期刊方阵“双效”期刊,2007年获吉林省新闻出版局期刊精品奖,2006年获中国科协精品期刊资助项目,2004年获首届北方八省优秀期刊奖,2003年中国免疫学杂志荣获第二届国家期刊奖(百种...,2001年中国免疫学杂志成为首批进入"中国期刊方阵"...,获1994年吉林省十佳期刊提名奖
  • 国内外数据库收录:
  • 美国化学文摘(网络版),英国农业与生物科学研究中心文摘,波兰哥白尼索引,美国剑桥科学文摘,日本日本科学技术振兴机构数据库,中国中国科技核心期刊,中国北大核心期刊(2004版),中国北大核心期刊(2008版),中国北大核心期刊(2011版),中国北大核心期刊(2014版),中国北大核心期刊(2000版)
  • 被引量:20795