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一种快速大量纯化骨骼肌Ryanodine受体的方法
  • ISSN号:1007-7626
  • 期刊名称:《中国生物化学与分子生物学报》
  • 时间:0
  • 分类:R331[医药卫生—人体生理学;医药卫生—基础医学] Q46[生物学—生理学]
  • 作者机构:[1]北京大学医学部生物物理学系,北京100083
  • 相关基金:国家自然科学基金(No.30370379和No.30330160)资助;致谢:北京大学医药卫生中心电镜室胡白河和中国科学院生物物理研究所徐伟研究员在电镜观察时给与了帮助,特此致谢.
中文摘要:

Ryanodine受体1(RyR1)在骨骼肌细胞的兴奋.收缩偶联过程中扮演重要角色,是肌质网快速释放Ca^2+的通道.RyR1的结构研究需要大量的且纯度很高的蛋白.目前,文献中的方法不能一次性得到大量的纯化蛋白,因而不能满足结构研究的需要.通过运用肝素(heparin,HP)层析与羟基磷灰石(hydroxyapatite,HA)层析,可以在1d内纯化获得毫克级RyR1.SDS-PAGE显示,RyR1纯度达95%以上.在透射电子显微镜下观察到RyR1是一个正方形的结构,形态类似儿童玩具风车.这些结果表明,该纯化方法获得的RyR1不仅纯度高而且结构完整.

英文摘要:

Ryanodine receptor 1 (RyR1) plays a vital role in excitation-contraction coupling in skeletal muscle. It is the fast Ca^2+ release channel of the sarcoplasmic reticulum. Large amount of purified protein is required for structural studies of RyR1. Currently, the methods in literature are all small scale and cannot fulfill the requirement for structural studies. By using fast flow heparin (HP)and hydroxyapatite (HA) chromatography, we purified the RyR1 in milligram scale in one day. SDS-PAGE showed that the purity is over 95 % ; electron microscopy revealed that the purified RyR1 molecule displays a square-like structure with an appearance of a pinwheel. These data demonstrate that both purify and structural integrity is achieved by this fast method.

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期刊信息
  • 《中国生物化学与分子生物学报》
  • 北大核心期刊(2011版)
  • 主管单位:中国科学技术协会
  • 主办单位:中国生物化学与分子生物学会 北京大学
  • 主编:周春燕
  • 地址:北京市学院路38号北京大学医学部
  • 邮编:100083
  • 邮箱:shxb@bjmu.edu.cn
  • 电话:010-82801416
  • 国际标准刊号:ISSN:1007-7626
  • 国内统一刊号:ISSN:11-3870/Q
  • 邮发代号:82-312
  • 获奖情况:
  • 被美国《CA》列入世界引用频次最高的《千种表》
  • 国内外数据库收录:
  • 俄罗斯文摘杂志,美国化学文摘(网络版),美国生物科学数据库,日本日本科学技术振兴机构数据库,中国中国科技核心期刊,中国北大核心期刊(2004版),中国北大核心期刊(2008版),中国北大核心期刊(2011版),中国北大核心期刊(2014版)
  • 被引量:9731