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基于生物质谱的乙酸酐稳定同位素标记定量蛋白质组学方法的建立与优化
  • ISSN号:0253-3820
  • 期刊名称:《分析化学》
  • 时间:0
  • 分类:O657.63[理学—分析化学;理学—化学]
  • 作者机构:[1]北京放射与辐射医学研究所,北京100850, [2]北京蛋白质组研究中心,北京102206, [3]蛋白质组学国家重点实验室,北京102206
  • 相关基金:本文系国家自然科学基金(No.20405017,No.20505018,No.20505019)、北京市科技计划重大项目(No.H030230280190)、国家重点基础研究发展规划项目(No.2004CB518707)、国家自然科学基金重点项目(No.20635010)和国家科技计划课题(N0.2006CBOD1600)资助课题
中文摘要:

建立了一种基于生物质谱的乙酸酐稳定同位素标记,定量蛋白质组学研究方法,优化了影响标记效率的各种条件。在pH8.0的Na2B4O7/H3BO3缓冲体系中,当乙酸酐摩尔浓度25倍过量于肽段摩尔量,22℃反应30min时,标记即可完全。对多对H6/D6-乙酸酐标记肽段在基质辅助激光解吸电离质谱中的动态范围及定量准确度进行了考察,并通过串联质谱分析确定了乙酰化位点。结果表明:在10倍和30倍动态范围内,线性关系良好(r=0.99,r=0.98),理论值和观测值的偏差分别为0.5%和20%。

英文摘要:

A strategy for quantitative proteome analysis was established through H6/D6-acetic anhydride stable isotopic labeling. Several major influencing factors, such as reactive buffer system, acetic anhydride concentration, pH value, temperature and reaction time, were examined. The results showed that a satisfied acetic anhydride labeling could be realized in a pH 8.0 reactive buffer composed of Na2B4OT/H3BO4 when the reaction was kept for 30 minutes at 22℃, with a 25-fold molar excess of acetic anhydride over free amino groupscontained peptides. Under the optimized conditions, the efficiency of acetic anhydride labeling for the tryptic peptides was up to 100%. The investigation on the dynamic range and quantitative accuracy were performed by calculating the ratio of the peak intensity in mass spectra with several H6/D6-acetylated peptide couples. A good linearity was obtained within the dynamic ranges of 1:10 and 1:30, with the R^2value of 0.99 and 0.98 and RSD of 0.5% and 20% , respectively.

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期刊信息
  • 《分析化学》
  • 北大核心期刊(2011版)
  • 主管单位:中国科学院
  • 主办单位:中国化学会 中国科学院长春应用化学研究所
  • 主编:杨秀荣
  • 地址:长春市人民大街5625号
  • 邮编:130022
  • 邮箱:fxhx@ciac.ac.cn
  • 电话:0431-85262017
  • 国际标准刊号:ISSN:0253-3820
  • 国内统一刊号:ISSN:22-1125/O6
  • 邮发代号:12-6
  • 获奖情况:
  • 1999获首届国家期刊奖,2000年获中国科学院优秀期刊特别奖,2001年入选中国期刊方阵“双高”期刊
  • 国内外数据库收录:
  • 俄罗斯文摘杂志,美国化学文摘(网络版),荷兰文摘与引文数据库,美国工程索引,美国乌利希期刊指南,美国剑桥科学文摘,美国科学引文索引(扩展库),日本日本科学技术振兴机构数据库,中国中国科技核心期刊,中国北大核心期刊(2004版),中国北大核心期刊(2008版),中国北大核心期刊(2011版),中国北大核心期刊(2014版),英国英国皇家化学学会文摘,中国北大核心期刊(2000版)
  • 被引量:52455